負(fù)壓封閉引流聯(lián)合臭氧水沖洗治療感染創(chuàng)面的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景:隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，各種事故頻發(fā);地震、海嘯、泥石流等自然災(zāi)難也時(shí)常發(fā)生。四肢開放性損傷日趨增多，而且常常因?yàn)榫薮蟮谋┝?dǎo)致皮膚及軟組織大面積缺損，骨骼、肌肉、血管、神經(jīng)等重要結(jié)構(gòu)外露。創(chuàng)面經(jīng)常被嚴(yán)重的污染，雖然經(jīng)過徹底清創(chuàng)及積極抗感染等治療，但創(chuàng)面感染仍然經(jīng)常發(fā)生，甚至因?yàn)閲?yán)重的感染無法有效地控制而被迫進(jìn)行截肢，給患者及社會(huì)都帶來沉重的負(fù)擔(dān)。長(zhǎng)期以來，因?yàn)榭股氐牟缓侠磉\(yùn)用，產(chǎn)生了以超級(jí)細(xì)菌為代表的耐藥菌;同時(shí)，也因?yàn)閲?yán)

2、重創(chuàng)傷導(dǎo)致的大面積皮膚軟組織缺損或者血管損傷等使創(chuàng)面局部的血液循環(huán)差，靜脈使用抗生素有時(shí)候很難在創(chuàng)面局部形成有效的殺菌濃度。開放性創(chuàng)傷徹底清創(chuàng)是控制和預(yù)防感染的重要環(huán)節(jié)之一，但是清創(chuàng)后創(chuàng)面的臨時(shí)覆蓋，殘留病原微生物的清除以及如何有效刺激肉芽組織的生長(zhǎng)最終覆蓋創(chuàng)面等多個(gè)環(huán)節(jié)同樣存在諸多問題，這些都為嚴(yán)重創(chuàng)面的治療提出了挑戰(zhàn)。
　　 負(fù)壓封閉引流技術(shù)(VSD)由Fleischmarm博士在1992年首創(chuàng)并用于開放性損傷的治療，現(xiàn)在已

3、經(jīng)被廣泛用于各種開放性創(chuàng)傷的治療并取得了較為良好的療效，特別是應(yīng)用在大范圍皮膚軟組織缺損不適合一期清創(chuàng)皮瓣轉(zhuǎn)移覆蓋的情況。許多研究發(fā)現(xiàn)VSD可以有效促進(jìn)傷口血液循環(huán)，增加局部血供，刺激肉芽組織生長(zhǎng)和抑制細(xì)菌繁殖等。但是在運(yùn)用VSD過程中也可能出現(xiàn)引流管堵塞，分泌物增多及感染加重等問題。一旦出現(xiàn)明顯的感染，VSD裝置必須盡快拆除或者更換，這樣會(huì)明顯的增加患者的痛苦，延長(zhǎng)住院時(shí)間以及增加醫(yī)療費(fèi)用等。隨著VSD技術(shù)的快速發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)有自帶沖

4、洗管道的VSD裝置，可以通過沖洗管道注入不同的沖洗液如生理鹽水或慶大霉素溶液等，沖洗液在一定程度上起到稀釋分泌物，減少引流管堵塞的作用。但是生理鹽水沒有抗菌作用，盡管慶大霉素溶液有一定抗菌性，可是局部運(yùn)用抗菌作用有限而且可能增加細(xì)菌耐藥的風(fēng)險(xiǎn)。
　　 臭氧及臭氧水具有強(qiáng)氧化性和高效的非特異性殺菌作用，已經(jīng)被廣泛用于口腔炎癥，皮膚感染，糖尿病足等多種感染性疾病。臭氧及臭氧水作為一種強(qiáng)氧化劑，不僅可以對(duì)創(chuàng)面進(jìn)行迅速的殺菌，而且研究表

5、明還可以促進(jìn)創(chuàng)面愈合。臭氧及臭氧水殺菌還不具有細(xì)菌耐藥的優(yōu)點(diǎn)，而細(xì)菌對(duì)抗生素耐藥正是目前所有抗生素所面臨的共同問題。
　　 創(chuàng)面感染主要是因?yàn)榇嬖诟鞣N病原微生物，結(jié)合該科多年創(chuàng)面分泌物細(xì)菌培養(yǎng)的結(jié)果及近年來文獻(xiàn)報(bào)道總結(jié)出目前創(chuàng)面主要的病原菌有銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌、大腸桿菌、MRSA、白色念珠菌等，其中以銅綠假單胞菌最為常見。這些細(xì)菌在體外的條件下臭氧水對(duì)其殺菌效率尚缺乏統(tǒng)一的報(bào)道，所以設(shè)計(jì)

6、臭氧水對(duì)這幾種細(xì)菌的體外殺菌實(shí)驗(yàn)來初步判體外條件下臭氧水殺菌效率及濃度選擇，為下一步VSD聯(lián)合臭氧水治療感染創(chuàng)面的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中臭氧水濃度選擇提供參考。
　　 另外，假設(shè)聯(lián)合VSD和臭氧水的優(yōu)點(diǎn)可能在感染性創(chuàng)面的治療上會(huì)產(chǎn)生更好的結(jié)果。感染性創(chuàng)面可能通過VSD沖洗管注入一定濃度的臭氧水能更為有效的殺菌和更為快速的恢復(fù)，因此，我們?cè)O(shè)計(jì)銅綠假單胞菌感染創(chuàng)面的動(dòng)物模型來驗(yàn)證。
　　 本實(shí)驗(yàn)研究主要分二部分，第一部分為臭氧水對(duì)感染創(chuàng)

7、面常見細(xì)菌滅菌效果的實(shí)驗(yàn)觀察，第二部分為負(fù)壓封閉引流(VSD)聯(lián)合臭氧水沖洗治療感染創(chuàng)面的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。
　　 第一部分不同濃度臭氧水對(duì)感染創(chuàng)面常見細(xì)菌的滅菌實(shí)驗(yàn)
　　 目的:研究不同濃度臭氧水對(duì)感染創(chuàng)面常見細(xì)菌的滅菌效果。
　　 方法:制取1mg/L、5mg/L、10 mg/L三種不同濃度的臭氧水，選擇生理鹽水作為陰性對(duì)照。對(duì)感染性創(chuàng)面常見細(xì)菌金黃色葡萄球菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌、白色念珠菌、銅綠假單

8、胞菌、大腸桿菌、MRSA進(jìn)行殺菌實(shí)驗(yàn)，計(jì)算不同濃度臭氧水對(duì)這7種細(xì)菌的殺菌率。
　　 結(jié)果:濃度為1 mg/L臭氧水對(duì)本實(shí)驗(yàn)7種細(xì)菌殺菌率均可達(dá)95.5％;濃度為5mg/L臭氧水對(duì)金黃色葡萄球菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌、白色念珠菌四種細(xì)菌殺菌率均大于99.9％，而對(duì)MRSA、大腸桿菌、銅綠假單胞菌殺菌率均為100％;濃度為10 mg/L臭氧水對(duì)本實(shí)驗(yàn)的7種細(xì)菌殺菌率均為100％。
　　 結(jié)論:體外實(shí)驗(yàn)表明5mg/

9、L及以上濃度的臭氧水可以有效殺滅感染創(chuàng)面常見的細(xì)菌。
　　 第二部分負(fù)壓封閉引流聯(lián)合臭氧水治療感染創(chuàng)面的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:探討負(fù)壓封閉引流(VSD)技術(shù)聯(lián)合臭氧水沖洗治療感染創(chuàng)面的療效及相關(guān)的作用機(jī)制。
　　 方法:將40只Wistar大鼠隨機(jī)均分為5組:A組:VSD聯(lián)合5 mg/L臭氧水沖洗組，B組:VSD聯(lián)合10 mg/L臭氧水沖洗組，C組:VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組，D組:VSD聯(lián)合生理鹽水沖洗組

10、，E組:常規(guī)換藥組。實(shí)驗(yàn)前24 hWistar大鼠背部剃毛，然后用質(zhì)量百分比為6％的硫化鈉在大鼠脊背側(cè)脫毛備皮，術(shù)前8h禁止食物和水。麻醉后Wistar大鼠背部消毒鋪無菌巾，制備3 cm×2 cm皮膚缺損創(chuàng)面深達(dá)肌層，常規(guī)壓迫止血后涂抹已制備好的銅綠假單胞菌菌懸液并用敷料覆蓋。動(dòng)物造模后常規(guī)喂養(yǎng)，48 h后觀察成功建立銅綠假單胞菌感染模型，立即行病灶清除及壓迫止血，安置VSD裝置貼膜并檢驗(yàn)無漏氣。術(shù)后各沖洗組負(fù)壓持續(xù)引流并經(jīng)沖洗管分別注

11、入5、10 mg/L臭氧水、慶大霉素溶液及生理鹽水沖洗1次/12 h，常規(guī)換藥組換藥1次/d，共5d。每組麻醉后、造模48h后及治療5d時(shí)行白細(xì)胞總數(shù)檢測(cè)，局部組織腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及表皮生長(zhǎng)因子(EGF)含量測(cè)定。治療5d局部組織行HE染色觀察炎性反應(yīng)。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用SPSS13.0(Chicago，Illinois)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水

12、沖洗組、VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組、VSD聯(lián)合生理鹽水沖洗組、常規(guī)換藥組的白細(xì)胞總數(shù)、TNF-α及EGF含量在麻醉后、造模48 h后及治療5d時(shí)比較采用重復(fù)測(cè)量General LinearModel中的Repeated Measures進(jìn)行分析，治療5d時(shí)各組白細(xì)胞總數(shù)、TNF-α、EGF含量比較采用Compare Means中的One-Way ANOVA進(jìn)行分析，若差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，采用LSD法進(jìn)行組間兩兩比較，P＜0.05認(rèn)為差異

13、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.動(dòng)物造模成功后及治療5d時(shí)各組創(chuàng)面的外觀40只Wistar大鼠均造模成功，無動(dòng)物死亡。造模48 h后創(chuàng)面及敷料見大量綠色分泌物，局部紅腫觸之易出血。治療5d時(shí)VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水沖洗組療效優(yōu)于其他各組，以VSD聯(lián)合10 mg/L臭氧水沖洗組療效最好。
　　 2.各組不同時(shí)間點(diǎn)白細(xì)胞總數(shù)的變化各組白細(xì)胞總數(shù)在麻醉后、造模48 h后及治療5d時(shí)的多重比較差異均有統(tǒng)

14、計(jì)學(xué)意義，造模48 h后各組白細(xì)胞總數(shù)均升高，經(jīng)治療降低。治療5d時(shí)VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水沖洗組、VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組白細(xì)胞總數(shù)明顯低于VSD聯(lián)合生理鹽沖洗組、常規(guī)換藥組;VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水沖洗組白細(xì)胞總數(shù)低于VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但VSD聯(lián)合5mg/L臭氧水沖洗組與VSD聯(lián)合10 mg/L臭氧水沖洗組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.各組不同時(shí)間點(diǎn)TNF-α及EG

15、F含量的表達(dá)各組TNF-α表達(dá)在麻醉后、造模48 h后及治療5d時(shí)多重比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，造模48 h后各組TNF-α均升高，經(jīng)治療降低。治療5d時(shí)VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水沖洗組、VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組TNF-α表達(dá)明顯低于VSD聯(lián)合生理鹽沖洗組、常規(guī)換藥組;VSD聯(lián)合5、10mg/L臭氧水沖洗組TNF-α表達(dá)明顯低于VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;VSD聯(lián)合5mg/L臭氧水沖洗組與VSD聯(lián)合10mg

16、/L臭氧水沖洗組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，VSD聯(lián)合10 mg/L臭氧水沖洗組最低。
　　 各組EGF表達(dá)在麻醉后、造模48 h后及治療5d時(shí)多重比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，造模48 h后及治療5d時(shí)各組EGF明顯升高。治療5d時(shí)VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水沖洗組、VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組EGF表達(dá)明顯高于VSD聯(lián)合生理鹽沖洗組、常規(guī)換藥組;VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水沖洗組EGF表達(dá)明顯高于VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組，

17、差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;VSD聯(lián)合5 mg/L臭氧水沖洗組與VSD聯(lián)合10mg/L臭氧水沖洗組比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，VSD聯(lián)合10mg/L臭氧水沖洗組最高。
　　 4.HE染色光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果治療5d時(shí)各組HE染色光鏡觀察結(jié)果顯示:VSD聯(lián)合5mg/L臭氧水沖洗組見部分炎性反應(yīng)細(xì)胞浸潤(rùn)，VSD聯(lián)合10 mg/L臭氧水沖洗組見少量的炎性反應(yīng)細(xì)胞侵潤(rùn)，VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組見較多炎性反應(yīng)細(xì)胞侵潤(rùn)，VSD聯(lián)合生理鹽水沖洗組和常規(guī)