負壓封閉引流聯(lián)合臭氧水沖洗治療感染創(chuàng)面的實驗研究.pdf

1、研究背景:隨著社會經(jīng)濟的快速發(fā)展，各種事故頻發(fā);地震、海嘯、泥石流等自然災難也時常發(fā)生。四肢開放性損傷日趨增多，而且常常因為巨大的暴力導致皮膚及軟組織大面積缺損，骨骼、肌肉、血管、神經(jīng)等重要結(jié)構(gòu)外露。創(chuàng)面經(jīng)常被嚴重的污染，雖然經(jīng)過徹底清創(chuàng)及積極抗感染等治療，但創(chuàng)面感染仍然經(jīng)常發(fā)生，甚至因為嚴重的感染無法有效地控制而被迫進行截肢，給患者及社會都帶來沉重的負擔。長期以來，因為抗生素的不合理運用，產(chǎn)生了以超級細菌為代表的耐藥菌;同時，也因為嚴

2、重創(chuàng)傷導致的大面積皮膚軟組織缺損或者血管損傷等使創(chuàng)面局部的血液循環(huán)差，靜脈使用抗生素有時候很難在創(chuàng)面局部形成有效的殺菌濃度。開放性創(chuàng)傷徹底清創(chuàng)是控制和預防感染的重要環(huán)節(jié)之一，但是清創(chuàng)后創(chuàng)面的臨時覆蓋，殘留病原微生物的清除以及如何有效刺激肉芽組織的生長最終覆蓋創(chuàng)面等多個環(huán)節(jié)同樣存在諸多問題，這些都為嚴重創(chuàng)面的治療提出了挑戰(zhàn)。
　　 負壓封閉引流技術(VSD)由Fleischmarm博士在1992年首創(chuàng)并用于開放性損傷的治療，現(xiàn)在已

3、經(jīng)被廣泛用于各種開放性創(chuàng)傷的治療并取得了較為良好的療效，特別是應用在大范圍皮膚軟組織缺損不適合一期清創(chuàng)皮瓣轉(zhuǎn)移覆蓋的情況。許多研究發(fā)現(xiàn)VSD可以有效促進傷口血液循環(huán)，增加局部血供，刺激肉芽組織生長和抑制細菌繁殖等。但是在運用VSD過程中也可能出現(xiàn)引流管堵塞，分泌物增多及感染加重等問題。一旦出現(xiàn)明顯的感染，VSD裝置必須盡快拆除或者更換，這樣會明顯的增加患者的痛苦，延長住院時間以及增加醫(yī)療費用等。隨著VSD技術的快速發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)有自帶沖

4、洗管道的VSD裝置，可以通過沖洗管道注入不同的沖洗液如生理鹽水或慶大霉素溶液等，沖洗液在一定程度上起到稀釋分泌物，減少引流管堵塞的作用。但是生理鹽水沒有抗菌作用，盡管慶大霉素溶液有一定抗菌性，可是局部運用抗菌作用有限而且可能增加細菌耐藥的風險。
　　 臭氧及臭氧水具有強氧化性和高效的非特異性殺菌作用，已經(jīng)被廣泛用于口腔炎癥，皮膚感染，糖尿病足等多種感染性疾病。臭氧及臭氧水作為一種強氧化劑，不僅可以對創(chuàng)面進行迅速的殺菌，而且研究表

5、明還可以促進創(chuàng)面愈合。臭氧及臭氧水殺菌還不具有細菌耐藥的優(yōu)點，而細菌對抗生素耐藥正是目前所有抗生素所面臨的共同問題。
　　 創(chuàng)面感染主要是因為存在各種病原微生物，結(jié)合該科多年創(chuàng)面分泌物細菌培養(yǎng)的結(jié)果及近年來文獻報道總結(jié)出目前創(chuàng)面主要的病原菌有銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、鮑曼不動桿菌、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌、大腸桿菌、MRSA、白色念珠菌等，其中以銅綠假單胞菌最為常見。這些細菌在體外的條件下臭氧水對其殺菌效率尚缺乏統(tǒng)一的報道，所以設計

6、臭氧水對這幾種細菌的體外殺菌實驗來初步判體外條件下臭氧水殺菌效率及濃度選擇，為下一步VSD聯(lián)合臭氧水治療感染創(chuàng)面的動物實驗中臭氧水濃度選擇提供參考。
　　 另外，假設聯(lián)合VSD和臭氧水的優(yōu)點可能在感染性創(chuàng)面的治療上會產(chǎn)生更好的結(jié)果。感染性創(chuàng)面可能通過VSD沖洗管注入一定濃度的臭氧水能更為有效的殺菌和更為快速的恢復，因此，我們設計銅綠假單胞菌感染創(chuàng)面的動物模型來驗證。
　　 本實驗研究主要分二部分，第一部分為臭氧水對感染創(chuàng)

7、面常見細菌滅菌效果的實驗觀察，第二部分為負壓封閉引流(VSD)聯(lián)合臭氧水沖洗治療感染創(chuàng)面的動物實驗研究。
　　 第一部分不同濃度臭氧水對感染創(chuàng)面常見細菌的滅菌實驗
　　 目的:研究不同濃度臭氧水對感染創(chuàng)面常見細菌的滅菌效果。
　　 方法:制取1mg/L、5mg/L、10 mg/L三種不同濃度的臭氧水，選擇生理鹽水作為陰性對照。對感染性創(chuàng)面常見細菌金黃色葡萄球菌、鮑曼不動桿菌、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌、白色念珠菌、銅綠假單

8、胞菌、大腸桿菌、MRSA進行殺菌實驗，計算不同濃度臭氧水對這7種細菌的殺菌率。
　　 結(jié)果:濃度為1 mg/L臭氧水對本實驗7種細菌殺菌率均可達95.5％;濃度為5mg/L臭氧水對金黃色葡萄球菌、鮑曼不動桿菌、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌、白色念珠菌四種細菌殺菌率均大于99.9％，而對MRSA、大腸桿菌、銅綠假單胞菌殺菌率均為100％;濃度為10 mg/L臭氧水對本實驗的7種細菌殺菌率均為100％。
　　 結(jié)論:體外實驗表明5mg/

9、L及以上濃度的臭氧水可以有效殺滅感染創(chuàng)面常見的細菌。
　　 第二部分負壓封閉引流聯(lián)合臭氧水治療感染創(chuàng)面的動物實驗研究
　　 目的:探討負壓封閉引流(VSD)技術聯(lián)合臭氧水沖洗治療感染創(chuàng)面的療效及相關的作用機制。
　　 方法:將40只Wistar大鼠隨機均分為5組:A組:VSD聯(lián)合5 mg/L臭氧水沖洗組，B組:VSD聯(lián)合10 mg/L臭氧水沖洗組，C組:VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組，D組:VSD聯(lián)合生理鹽水沖洗組

10、，E組:常規(guī)換藥組。實驗前24 hWistar大鼠背部剃毛，然后用質(zhì)量百分比為6％的硫化鈉在大鼠脊背側(cè)脫毛備皮，術前8h禁止食物和水。麻醉后Wistar大鼠背部消毒鋪無菌巾，制備3 cm×2 cm皮膚缺損創(chuàng)面深達肌層，常規(guī)壓迫止血后涂抹已制備好的銅綠假單胞菌菌懸液并用敷料覆蓋。動物造模后常規(guī)喂養(yǎng)，48 h后觀察成功建立銅綠假單胞菌感染模型，立即行病灶清除及壓迫止血，安置VSD裝置貼膜并檢驗無漏氣。術后各沖洗組負壓持續(xù)引流并經(jīng)沖洗管分別注

11、入5、10 mg/L臭氧水、慶大霉素溶液及生理鹽水沖洗1次/12 h，常規(guī)換藥組換藥1次/d，共5d。每組麻醉后、造模48h后及治療5d時行白細胞總數(shù)檢測，局部組織腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及表皮生長因子(EGF)含量測定。治療5d局部組織行HE染色觀察炎性反應。
　　 統(tǒng)計學處理:應用SPSS13.0(Chicago，Illinois)統(tǒng)計學軟件，計量資料用均數(shù)±標準差（(x)±s）表示，VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水

12、沖洗組、VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組、VSD聯(lián)合生理鹽水沖洗組、常規(guī)換藥組的白細胞總數(shù)、TNF-α及EGF含量在麻醉后、造模48 h后及治療5d時比較采用重復測量General LinearModel中的Repeated Measures進行分析，治療5d時各組白細胞總數(shù)、TNF-α、EGF含量比較采用Compare Means中的One-Way ANOVA進行分析，若差異有統(tǒng)計學意義，采用LSD法進行組間兩兩比較，P＜0.05認為差異

13、有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.動物造模成功后及治療5d時各組創(chuàng)面的外觀40只Wistar大鼠均造模成功，無動物死亡。造模48 h后創(chuàng)面及敷料見大量綠色分泌物，局部紅腫觸之易出血。治療5d時VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水沖洗組療效優(yōu)于其他各組，以VSD聯(lián)合10 mg/L臭氧水沖洗組療效最好。
　　 2.各組不同時間點白細胞總數(shù)的變化各組白細胞總數(shù)在麻醉后、造模48 h后及治療5d時的多重比較差異均有統(tǒng)

14、計學意義，造模48 h后各組白細胞總數(shù)均升高，經(jīng)治療降低。治療5d時VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水沖洗組、VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組白細胞總數(shù)明顯低于VSD聯(lián)合生理鹽沖洗組、常規(guī)換藥組;VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水沖洗組白細胞總數(shù)低于VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組，差異均有統(tǒng)計學意義，但VSD聯(lián)合5mg/L臭氧水沖洗組與VSD聯(lián)合10 mg/L臭氧水沖洗組比較差異無統(tǒng)計學意義。
　　 3.各組不同時間點TNF-α及EG

15、F含量的表達各組TNF-α表達在麻醉后、造模48 h后及治療5d時多重比較差異有統(tǒng)計學意義，造模48 h后各組TNF-α均升高，經(jīng)治療降低。治療5d時VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水沖洗組、VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組TNF-α表達明顯低于VSD聯(lián)合生理鹽沖洗組、常規(guī)換藥組;VSD聯(lián)合5、10mg/L臭氧水沖洗組TNF-α表達明顯低于VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組，差異均有統(tǒng)計學意義;VSD聯(lián)合5mg/L臭氧水沖洗組與VSD聯(lián)合10mg

16、/L臭氧水沖洗組比較差異有統(tǒng)計學意義，VSD聯(lián)合10 mg/L臭氧水沖洗組最低。
　　 各組EGF表達在麻醉后、造模48 h后及治療5d時多重比較差異有統(tǒng)計學意義，造模48 h后及治療5d時各組EGF明顯升高。治療5d時VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水沖洗組、VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組EGF表達明顯高于VSD聯(lián)合生理鹽沖洗組、常規(guī)換藥組;VSD聯(lián)合5、10 mg/L臭氧水沖洗組EGF表達明顯高于VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組，

17、差異均有統(tǒng)計學意義;VSD聯(lián)合5 mg/L臭氧水沖洗組與VSD聯(lián)合10mg/L臭氧水沖洗組比較差異也有統(tǒng)計學意義，VSD聯(lián)合10mg/L臭氧水沖洗組最高。
　　 4.HE染色光學顯微鏡觀察結(jié)果治療5d時各組HE染色光鏡觀察結(jié)果顯示:VSD聯(lián)合5mg/L臭氧水沖洗組見部分炎性反應細胞浸潤，VSD聯(lián)合10 mg/L臭氧水沖洗組見少量的炎性反應細胞侵潤，VSD聯(lián)合慶大霉素溶液沖洗組見較多炎性反應細胞侵潤，VSD聯(lián)合生理鹽水沖洗組和常規(guī)