抑制miRNA-21的表達對膽管癌細胞增殖、凋亡、侵襲的影響及其靶基因的探討.pdf

1、膽管癌是常見的膽道惡性腫瘤之一,其惡性程度高,且發(fā)病隱匿,早期診斷困難,手術切除率低。近年研究發(fā)現(xiàn)多種MicroRNA(miRNA)的表達異常與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。其中,miRNA-21在膽管癌組織中呈高表達并起著癌基因的作用。本研究通過抑制人膽管癌細胞RBE中miRNA-21的表達,觀察RBE細胞增殖、凋亡及侵襲的變化,并進一步探討miRNA-21在RBE細胞中的作用機制。
　　目的:通過轉染miRNA-21抑制劑,抑制人膽

2、管癌細胞株RBE細胞miRNA-21的表達,觀察RBE細胞增殖、凋亡、侵襲等生物學行為的變化,并探討miRNA-21在膽管癌細胞中可能調控的靶基因及其作用機制。
　　方法:以人膽管癌細胞RBE細胞為研究對象,根據處理方法不同,細胞分為四組:正常細胞組(cell組)、脂質體組(僅予脂質體,lipo組)、陰性對照組(轉染無關序列, miRNA-21-NC)、miRNA-21抑制組(轉染 miRNA-21抑制劑,miRNA-21-IN)

3、。經熒光定量PCR證實轉染成功后,應用MTT方法檢測細胞增殖活性的變化,應用流式細胞儀檢測細胞凋亡的變化,通過Transwell侵襲實驗檢測細胞侵襲力的改變,通過熒光定量PCR技術及蛋白質免疫印跡法(Western blot)檢測RBE細胞中RECK,maspin mRNA及蛋白表達的改變。
　　結果:miRNA-21在經轉染miRNA-21抑制劑后在RBE細胞中的表達得到有效抑制,熒光定量PCR結果顯示與正常細胞相比,其表達下降

4、了0.0014倍。MTT結果顯示RBE細胞在抑制miRNA-21表達后增殖活性明顯受到抑制(P＜0.05),流式細胞儀結果顯示各組細胞凋亡率分別為2.29％(cell),2.43%(lipo),2.89%(miRNA-21-NC),19.35%(miRNA-21-IN), miRNA-21的表達降低后,RBE細胞的凋亡率明顯增高(P＜0.05),各組細胞Transwell小室顯微鏡下細胞計數分別為:54.0±2.1(cell),45.4

5、±3.2(lipo),40.8±2.4(miRNA-21-NC),19.2±1.5(miRNA-21-IN),實驗組 RBE細胞相對于對照組其侵襲力明顯下降(P＜0.05)并且熒光定量 PCR及western blot結果顯示在miRNA-21抑制后,RECK, maspin mRNA及其蛋白的表達明顯上調(P＜0.05)。
　　結論:通過抑制miRNA-21的表達可抑制RBE細胞的增值,促進RBE細胞的凋亡,降低RBE細胞的侵襲