曲古抑菌素A促進(jìn)炎癥牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的研究.pdf

1、分類號：R 7 8 1 ．3密 級：學(xué)位類別： 科學(xué)學(xué)位囹 專業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼：10062學(xué) 號：2 0 1 0 6 0 2 5 9 1學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又坪鼉科袁號碩士學(xué)位論文M A S T E R ’S D I S S E R T A T I o N論文題目：曲古抑菌素A 促進(jìn)炎癥牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的研究T IT L E T r i c h o s t a t i nA P r o m o t e s O s t e o g e

2、n i cD i f f e r e n t i a t i o no f M e s e n c h y m a l S t e m C e l l sD e r i v e d f r o m I n f l a m e d G i n g i v a l T i s s u e一級學(xué)科：口腔醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：口腔臨床醫(yī)學(xué)論文作者：肖蕊指導(dǎo)教師：賈智副教授導(dǎo)師組成員：劉大勇主治醫(yī)師趙夢明副教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年五月天津醫(yī)科大

3、學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的：本研究探討炎癥微環(huán)境下，牙齦問充質(zhì)干細(xì)胞的乙酰化修飾，并觀察曲古抑菌素A ( T r i c h o s t a t i n A ，T S A ) 體外條件下促進(jìn)炎癥牙齦干細(xì)胞的成骨分化能力，為研究牙周炎治療提供可能的新型治療藥物。方法：1 ．牙齦干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及生物學(xué)鑒定選取牙周健康及慢性牙周炎患者的牙齦，采用酶消化法進(jìn)行原代培養(yǎng)。取生長狀況良好的第三代牙齦干細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測并分析其表面抗原C D l

4、 4 6 、C D 9 0 、S S E A 一4 、O T C ．4 的表達(dá)，測定克隆形成率，進(jìn)行成骨和成脂誘導(dǎo)，分別進(jìn)行堿性磷酸酶染色、茜素紅染色和油紅O 染色，檢測成骨分化和成脂分化情況。2 ．R T - P C R 法檢測組蛋白去乙酰化酶H D A C l 、3 、6 在健康及炎癥牙齦干細(xì)胞中的表達(dá)，計算相對灰度值并進(jìn)行半定量分析。3 ．組蛋白去乙?；敢种苿㏕ S A 對健康和炎癥牙齦干細(xì)胞成骨分化的影響取第3 ．5 代炎癥及

5、健康牙齦干細(xì)胞，傳代接種至6 孔板，待8 0 ％融合后加入成骨誘導(dǎo)液中誘導(dǎo)培養(yǎng)，實驗組加入含T S A 的D M S O 使終濃度為1 0 0n M ，對照組加入等量D M S O 。成骨誘導(dǎo)7 天進(jìn)行堿性磷酸酶染色、堿性磷酸酶活性分析，誘導(dǎo)2 1 天R T - P C R 檢測R u n x 2 、O C N 、H D A C l 、H D A C 3 、H D A C 6 m R N A 的表達(dá)，誘導(dǎo)2 8 天進(jìn)行茜素紅染色、C a

6、 2 + 濃度定量分析。結(jié)果：1 ．通過酶消化法獲得的人健康及炎癥牙齦干細(xì)胞，鏡下呈巢式生長，細(xì)胞排列緊密，周邊細(xì)胞呈短梭形，體積較小。流式細(xì)胞儀檢測并分析其表面抗原C D l 4 6 陽性細(xì)胞率4 9 ．3 3 ％，C D 9 0 陽性細(xì)胞率9 0 ．7 7 ％，S S E A 一4 陽性細(xì)胞率5 4 ．9 8 ％，O T C ．4 陽性細(xì)胞率3 3 ．6 9 ％?？寺⌒纬陕适? 7 ％。牙齦干細(xì)胞在成骨誘導(dǎo)液的作用下，細(xì)胞復(fù)層生長，