三氯乙烯藥疹樣皮炎發(fā)病機制及其易感性研究.pdf

1、本文由5個部分組成：第一部分發(fā)現(xiàn)病例場所所用三氯乙烯成份分析；第二部分三氯乙烯藥疹樣皮炎患者部分免疫功能變化觀察；第三部分三氯乙烯染毒小鼠免疫功能變化研究；第四部分三氯乙烯藥疹樣皮炎與免疫相關(guān)基因易感性關(guān)系的研究；第五部分三氯乙烯藥疹樣皮炎患者基因表達變化的初步研究。 第一部分發(fā)現(xiàn)病例場所所用三氯乙烯成份分析 目的：選取部分發(fā)生三氯乙烯藥疹樣皮炎患者工作場所中正在使用的三氯乙烯進行全成份氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)機檢測，檢測其中各

2、種雜質(zhì)的含量，了解各工廠導致三氯乙烯藥疹樣皮炎的三氯乙烯中是否存在共同雜質(zhì)，為確定三氯乙烯在該病發(fā)病機制中作用提供依據(jù)。 方法：選取9個發(fā)生三氯乙烯藥疹樣皮炎工廠病人發(fā)病時正在使用的三氯乙烯，采用HP6890/5973氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，抽取0.4ml三氯乙烯直接進樣。在經(jīng)氣相色譜分離后，對離子流中每一峰的質(zhì)譜圖與譜庫中譜圖比對，與某物質(zhì)譜圖匹配率達90％以上時確定為該物質(zhì)。進行全成份分析。然后將所有樣品進行匯總，觀察是否存在

3、共同雜質(zhì)。如存共同雜質(zhì)則判斷其是否存存致敏可能。 結(jié)果：9個工作場所三氯乙烯中雜質(zhì)不盡相同，其中9個樣品中共同的成份為三氯乙烯、1-1-2-三氯乙烷和四氯乙烯。另外，三氯甲烷、二甲苯和四氯化碳分別在約2/3樣品中檢出。 結(jié)論：綜合本次研究結(jié)果，所有樣品中除三氯乙烯外存在共同雜質(zhì)：1-1-2-三氯乙烷和四氯乙烯，但尚未見二者引起致敏的報道。初步認為三氯乙烯藥疹樣皮炎的過敏原可能是三氯乙烯。 第二部分三氯乙烯致藥疹樣

4、皮炎患者部分免疫功能變化 目的：通過對三氯乙烯致藥疹樣皮炎患者部分免疫功能指標的觀察，了解三氯乙烯藥疹樣皮炎患者發(fā)病時機體部分變化情況，為探索發(fā)病機制提供線索。 方法：采集病人外周靜脈血進行體外實驗。采用MTT法觀察患者淋巴細胞在加入三氯乙烯前后增殖情況差異；觀察患者白細胞在體外加入三氯乙烯后其移動范圍的變化以及將三氯乙烯藥疹樣皮炎患者CD4+/CD8+比值與正常對照進行比較。 結(jié)果：三氯乙烯(40mg/L及80

5、mg/L)可顯著促進三氯乙烯致藥疹樣皮炎患者淋巴細胞增殖(P＜0.05)；該類患者CD4+/CD8+與正常對照組相比差異無顯著性意義；三氯乙烯對該類患者白細胞移動的抑制指數(shù)與對照組相比無顯著性差異。 結(jié)論：提示TCE可能是該類患者免疫反應(yīng)的抗原(或半抗原)。 第三部分三氯乙烯染毒小鼠免疫功能變化研究 目的：本部分研究應(yīng)用NIH小鼠染毒后，進行小鼠足跖腫脹實驗和脾淋巴細胞增殖實驗等，觀察了三氯乙烯染毒小鼠免疫功能的

6、變化，為探索三氯乙烯致敏作用提供依據(jù)。 方法：給予NIH小鼠皮下染毒三氯乙烯后，研究胸腺、脾、肝臟等臟器系數(shù)變化情況、進行足跖腫脹實驗、脾淋巴細胞增殖實驗等。 結(jié)果：三氯乙烯染毒小鼠胸腺、脾臟器系數(shù)等未見明顯變化。24h、48h時小鼠足跖腫脹系數(shù)明顯高于對照組。80mg/L三氯乙烯可抑制對照組脾淋巴細胞的增殖，但可促進染毒小鼠脾淋巴細胞增殖。 結(jié)論：三氯乙烯可能誘導NIH小鼠產(chǎn)生遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)。 第四部分

7、三氯乙烯藥疹樣皮炎與免疫相關(guān)基因易感性關(guān)系的研究 目的：根據(jù)HLA-DM、HLA-DQA和Lag-3基因多態(tài)性在三氯乙烯藥疹樣皮炎和正常對照分布情況，探索三氯乙烯藥疹樣皮炎的易感性基因，為其危害防治提供依據(jù)。 方法：提取病例組及對照組淋巴細胞DNA，應(yīng)用降落式PCR擴增，分別采用限制性片斷長度多態(tài)性檢測方法、直接測序或二者結(jié)合方法，確定其HLA-DM、HLA-DQA和Lag-3基因多態(tài)性，比較兩組之間三個基因的等位基因型

8、和基因型出現(xiàn)頻率。 結(jié)果：病例組HLA-DMA*0101等位基因頻率明顯高于對照組(P＜0.05)，病例組HLA-DMA*0102等位基因頻率明顯低于對照組。病例組HLA-DMB*0103等位基因頻率明顯高于對照組(P＜0.05)。其他等位基因型頻率在兩組之間均無顯著性差異。對照組HLA-DMA*0102-*0102純合子比例明顯高于病例組(P＜0.05)，OR為3.86，CI為2.78-4.94。而對于HLA-DMB，病例組*

9、0101-*0102雜合子比例明顯低于對照組(P＜0.05)，OR為3.59，CI為2.71-4.47。其他HLA-DMA、DMB基因型頻率在兩組之間均無顯著性差異。 HLA-DQA等位基因型中，*0201頻率在病例組明顯高于對照組(P＜0.05)。*05頻率在病例組明顯低于對照組，但P值經(jīng)校正后大于0.05。 所有受檢的病例及對照Lag-3基因的exonl-6及exon-8序列與Genebank中序列一致，未發(fā)現(xiàn)缺失、

10、突變及多態(tài)性情況。exon-7存在多態(tài)性，但其在兩組間分布情況差異無顯著性(P＞0.05)。 結(jié)論：HLA-DM基因、HLA-DQA基因多態(tài)性可能與三氯乙烯藥疹樣皮炎的易感性有關(guān)。Lag-3基因多態(tài)性可能與三氯乙烯藥疹樣皮炎的易感性無關(guān)。 第五部分三氯乙烯藥疹樣皮炎患者基因表達變化的初步研究 目的：了解三氯乙烯藥疹樣皮炎患者治療前后(治療后近似看作正常)基因表達譜是否存在差異，涉及哪些基因。進而選取病人共同改變的

11、部分基因，應(yīng)用熒光定量PCR方法在其他病人加以驗證。通過觀察三氯乙烯藥疹樣皮炎治療前后外周血淋巴細胞中基因表達改變，探索三氯乙烯藥疹樣皮炎涉及哪些基因及其病理過程。為研究三氯乙烯藥疹樣皮炎發(fā)病機制提供基礎(chǔ)資料。 方法：收集12例病人入院及激素治療一個月后的外周血淋巴細胞，分別提取總RNA。其中2例應(yīng)用基因芯片檢測治療前后基因表達譜改變。然后比較兩例結(jié)果，找出其共有的改變。在基因芯片篩選出的共有差異表達基因中選取部分表達差異較大的

12、10個基因在其他10個病人中加以驗證。 結(jié)果：將兩個樣品信號強度間的比值(Ratio)大于2或小于0.5的數(shù)據(jù)作為有表達變化的基因數(shù)據(jù)。在病例506中有基因表達改變317個，其中與治療后相比，在治療前樣品中表達上調(diào)的基因有262個，下調(diào)表達的基因有55個；在病例507中這類基因有591個，其中與治療后相比，在治療前樣品中表達上調(diào)的基因有467個，下調(diào)表達的基因有124個。兩例同為上調(diào)的基因147個，同為下調(diào)的基因9個。從初步的結(jié)