魷魚內臟糖蛋白提取分離及其免疫調節(jié)作用的研究.pdf

1、糖蛋白是指由寡糖與多肽鏈共價連接而成的一類結合蛋白質。研究表明，糖蛋白具有調節(jié)免疫、抑制腫瘤、降低血糖、血脂、抗氧化、防衰老等作用，在新型特種藥物及功能性食品開發(fā)方面具有廣闊的應用前景。 本文檢測了魷魚內臟的營養(yǎng)成分，優(yōu)化了魷魚內臟中糖蛋白的提取工藝，對魷魚內臟糖蛋白進行了分離、純化，并對其免疫調節(jié)活性進行研究，為綜合利用魷魚內臟資源提供理論依據(jù)。 通過對魷魚內臟營養(yǎng)成分檢測結果顯示：魷魚內臟中主要營養(yǎng)成分是蛋白質和脂肪

2、，分別為57.62％和14.76％，總糖含量較高，為8.76％；氨基酸總量為46.4％，必需氨基酸和氨基酸總量的比值以及必需氨基酸和非必需氨基酸比值分別為37.3％和0.59。在所測的氨基酸中，谷氨酸含量最高，為6.47％，必需氨基酸中亮氨酸含量最高，為3.62％；脂肪酸中EPA和DHA含量較高，分別為14.29％和20.23％；礦物質元素中Ca、Mg、P含量充足，Zn、Fe、Cu等微量元素含有較高，分別為40.5μg/g、10.3μg

3、/g、1.1μg/g。 以糖蛋白得率為指標，分別研究了料液比、溫度、提取時間及提取液鹽濃度對魷魚內臟糖蛋白提取得率的影響，并根據(jù)L9(34)正交表綜合分析確定最佳提取工藝條件為：料液比為1:6、浸提時間為55min、浸提液鹽濃度為3％、浸提溫度為80℃。 采用硫酸銨分級沉淀和SephadexG-100凝膠柱層析相結合，對魷魚內臟糖蛋白進行了分離純化。用硫酸銨的飽和度分別為20-40％，40-60％，60-80％分三級沉淀

4、糖蛋白，得到GSV-1、GSV-2和GSV-3，再對其進行SephadexG-100凝膠過濾，使分級蛋白中的蛋白質按其分子量的大小先后洗脫，分別收集到魷魚內臟糖蛋白GSV1-1、GSV2-1和GSV3-1。并檢測了上述樣品的部分理化指標。通過SDS-聚丙烯酰胺電泳分析結果表明，魷魚內臟糖蛋白的分子量范圍在36KD-130KD之間；對純化后樣品進行紅外光譜分析說明，這些樣品具有典型的糖蛋白的特征吸收峰。 本文研究了魷魚內臟糖蛋白對

5、KM小鼠的非特異性免疫、細胞免疫和體液免疫三方面影響，確定其免疫調節(jié)作用。具體實驗方法是：小鼠炭廓清實驗和免疫器官重量的測定；MTT法檢測NK活性和小鼠脾細胞增殖實驗；血清溶血素水平和抗體生成細胞數(shù)的測定。實驗結果如下： (1)魷魚內臟糖蛋白粗品(GSV-0)三個劑量均對免疫抑制小鼠和正常小鼠的廓清指數(shù)有顯著的增強作用；GSV-0在10mg/kg劑量對免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)有顯著的提高作用，GSV-0在30mg/kg、100mg

6、/kg劑量對正常小鼠的胸腺指數(shù)有非常顯著和顯著提高作用。 (2)GSV-0、GSV-1和GSV1-1只在較高劑量時顯著促進小鼠脾細胞增殖，而GSV-2、GSV-3、GSV1-1、GSV2-1和GSV3-1在低劑量時就能顯著促進小鼠脾細胞增殖；GSV不能增強有絲分裂原ConA誘導的脾細胞增殖反應；GSV對NK細胞活性的影響隨著的純度的提高而明顯增強，且樣品GSV1-1、GSV2-1和GSV3-1在各個劑量上，均對NK細胞都有明顯的