大豆糖蛋白的分離純化、結(jié)構(gòu)分析及免疫調(diào)節(jié)功能的研究.pdf

1、糖蛋白是由短的寡糖鏈與蛋白質(zhì)共價(jià)相連構(gòu)成的分子，即是指糖和蛋白質(zhì)間，以蛋白質(zhì)為主，其一定部位以共價(jià)鍵與若干糖分子鏈相連而構(gòu)成的分子。糖蛋白在自然界廣泛存在于動(dòng)物、植物和某些微生物中，在生物體內(nèi)以多種形式存在，對(duì)生命體起著廣泛而重要的作用。本文以大豆中的糖蛋白為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行分離、純化、結(jié)構(gòu)鑒定及增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)能力的研究，以期了解糖鏈對(duì)大豆蛋白性質(zhì)及功能的影響，為更加廣泛和充分地利用大豆提供研究基礎(chǔ)。 大豆顆粒經(jīng)粉碎、干燥、脫脂

2、后，用磷酸鹽緩沖液和氯化鈉溶液4℃浸提過夜，浸提液用硫酸銨沉淀。以緩沖液pH值、料液比和鹽濃度為影響因子，進(jìn)行三元二次旋轉(zhuǎn)正交實(shí)驗(yàn)，得出適合大豆糖蛋白的最佳提取工藝：浸提液pH值6.8，浸提液鹽濃度0.15 mol/L，料液比1：10。 浸提液經(jīng)硫酸銨沉淀后進(jìn)行離心，用蒸餾水復(fù)溶沉淀蛋白，經(jīng)緩沖液透析平衡、聚乙二醇6000濃縮后，用DEAE-Cellulose 52離子交換層析柱進(jìn)行初步分離，經(jīng)磷酸鈉緩沖液、0.1mol/L N

3、aCl和0.2mol/L NaCl的磷酸鈉緩沖液洗脫后，收集蛋白峰和糖峰的重合峰。收集該峰的蛋白液，經(jīng)透析和濃縮后上Sephadex G-200凝膠層析柱進(jìn)一步純化，得到大豆糖蛋白純品。 大豆糖蛋白的純品經(jīng)蛋白質(zhì)染色和糖染色，證明其是糖蛋白。微量凱氏定氮法測(cè)定，該糖蛋白中的蛋白含量為83.01％。苯酚-硫酸顯色反應(yīng)測(cè)定，糖蛋白中的糖含量為9.84％。SDS-PAGE電泳檢測(cè)其有一條帶，分子量約為61kDa。圓二色譜圖分析表明大豆

4、糖蛋白是典型α-螺旋結(jié)構(gòu)，紅外光譜分析其含有a型糖苷鍵，β-消除反應(yīng)證明其是O-糖蛋白。消除反應(yīng)后的糖鏈由Sephadex G-50凝膠層析柱分離，糖鏈部分經(jīng)過衍生化后進(jìn)行氣相色譜分析，結(jié)果表明其糖鏈部分的主要含糖為：鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。對(duì)β-消除反應(yīng)前后的蛋白質(zhì)進(jìn)行DSC分析，結(jié)果表明，大豆糖蛋白的變性溫度為60℃，且該大豆糖蛋白的寡糖鏈對(duì)大豆糖蛋白的抗熱變性功能無顯著影響。 應(yīng)用該糖蛋白進(jìn)行小鼠免疫調(diào)節(jié)能力