禽病毒性腫瘤發(fā)生過程中血漿內(nèi)Hsp90α蛋白的檢測.pdf

1、病毒性腫瘤在雞群中較為常見，導(dǎo)致雞的生產(chǎn)性能下降及死亡率升高，給家禽業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。腫瘤的發(fā)生和發(fā)展的分子機理、抗腫瘤疫苗的發(fā)現(xiàn)與研發(fā)、雞場病毒的凈化是目前亟待解決的科學(xué)問題，隨著對腫瘤發(fā)生機理認(rèn)識的深入，熱休克蛋白在腫瘤發(fā)生中的重要作用被逐步揭示。熱休克蛋白90α(Hsp90α)是伴侶蛋白，可以輔助蛋白折疊和維持細胞內(nèi)多種信號傳導(dǎo)，從而促進細胞存活和生長。2009年，清華大學(xué)羅永章團隊在世界上首次宣布了人體腫瘤細胞特異分泌Hsp

2、90α的調(diào)控機理，同時首次揭示了細胞外Hsp90α與細胞內(nèi)Hsp90α的分子差異。該團隊進一步證明了分泌型Hsp90α能促進腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移，且其在血液中的含量與腫瘤惡性程度正相關(guān)。經(jīng)過大量的臨床試驗，成功證明了Hsp90α是人肺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物，可用于患者病情監(jiān)測和療效評價。但是，Hsp90α與家禽腫瘤病的關(guān)系尚無明確的定論。本論文的工作主要研究家禽發(fā)生病毒性腫瘤病（禽白血病和馬立克氏?。r，血液中Hsp90α的含量及其變化;以及急性轉(zhuǎn)

3、化型ALV對鵪鶉的致病性。
　　本試驗將雞急性纖維肉瘤研磨液、輔助病毒（外源性非急性轉(zhuǎn)化型禽白血病病毒）、PBS分別于腹腔和頸部皮下接種的兩種方式對1日齡海蘭褐雞進行攻毒，連續(xù)三周采取抗凝血，2000 r/min4℃離心2min，取上層血漿，取其中100μL（剩余血漿-80℃保存）接種到已經(jīng)貼壁的CEF96孔細胞培養(yǎng)板，2h后換細胞培養(yǎng)維持液培養(yǎng)7天，取上清經(jīng)ALV-p27抗原檢測試劑盒檢測。剩余血漿用于檢測在病毒血癥發(fā)展過程中血

4、漿中Hsp90α的含量，通過對病理組織切片HE染色的方法對腫瘤組織進行病理組織學(xué)的觀察與研究;同時本試驗還將急性纖維肉瘤的研磨液，分別在鵪鶉的幼雛期和成年期，采取頸部皮下和腹腔接種的方式攻毒，以研究鵪鶉對急性纖維肉瘤的病毒易感性。
　　GX0101株MDV是國內(nèi)外從雞體內(nèi)分離到的整合有網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒長末端重復(fù)序列的第一株重組野毒株。本試驗分別對7日齡SPF雞人工腹腔接種MDV GX0101毒株、1日齡免疫7日齡腹腔接種MD

5、V GX0101毒株、7日齡腹腔接種PBS，三種方式構(gòu)建馬立克病腫瘤模型，連續(xù)三周采取無菌抗凝血，2000 r/min4℃離心2min，取上層血漿接種CEF細胞，7天后檢測細胞上清病毒感染情況，剩余的血漿用于檢測病毒血癥發(fā)展過程中Hsp90α的含量，并通過對病理組織切片HE染色的方法對腫瘤組織進行病理組織學(xué)的觀察與研究。
　　結(jié)果顯示，禽白血病急性腫瘤組的Hsp90α平均含量高于輔助病毒組及空白對照組;禽馬立克氏病攻毒組的Hsp9

6、0α平均含量高于疫苗組和空白對照組。說明受腫瘤病毒感染后的雞血液中Hsp90α含量有一定程度的升高，病毒引起的應(yīng)激促使Hsp90α表達量增加。該結(jié)論為后期建立家禽腫瘤病與Hsp90α含量之間的相關(guān)關(guān)系做鋪墊，有助于研究在家禽上應(yīng)用以Hsp90α為靶向確定家禽腫瘤病的血液學(xué)研究。
　　而在急性纖維肉瘤對鵪鶉的易感性方面的研究中，無論是1日齡幼雛或是60日齡成年的鵪鶉進行腹腔或頸部皮下接毒，p27檢測、斑點雜交試驗，均為陰性，未檢測出