番木瓜采后果實成熟特異表達基因的研究.pdf

1、本研究旨在分離番木瓜采后在果實中特異表達的基因，進而鑒定這些基因在番木瓜果實成熟過程中的作用。對采后自然成熟番木瓜果實的硬度變化情況進行了研究。結果表明，番木瓜果實采后自然成熟條件下硬度呈逐漸下降趨勢。將采后番木瓜果實按果皮顏色可分為六級，其中一級硬度為14.7kg/cm2，六級為2.0kg/cm2，結合Paull(1996)對采后番木瓜乙烯變化的結論：乙烯含量在果色破色前(一級)最微，到開始變軟(三至四級)時達到高峰以后迅速下降，而此

2、時番木瓜還沒有達到食用風味最佳，也沒有達到成熟，因此相比而言我們使用硬度為指標進行選擇比較方便可行。當番木瓜為五級時，食用風味最佳，糖分和芳香味等指標都達到最好的程度。根據這一結果，選取采后一級和五級番木瓜果實(1號、2號)，以2號作為檢測子、1號作為驅動子，進行正向抑制差減雜交。用T/A法構建正向差減文庫(含221個克隆)。采用PCR方法篩選正向差減文庫獲得138個重組子，對這些重組子進行array(反向Northern點雜交)，篩選

3、出在1號和2號中表達有明顯差異的cDNA片段67個，再對這些篩選出的cDNA插入片段進行了序列測定，結果表明：共有58個cDNA的測序結果可進行BLASTn和BLASTx分析。其中：22個cDNA序列與數據庫中功能未知的核酸序列的同源性達60～90％，占總cDNA片段的38％；32個cDNA序列推導出的氨基酸序列與功能己知的cDNA推導出的氨基酸序列同源性達60～100％(比較的核酸長度均在200bp以上)，約占62％；在這些cDNA序

4、列中，有1個cDNA序列與己發(fā)表的來源于番木瓜的已知功能的基因序列同源性高達97％，還有兩個序列與番木瓜未知功能的基因具有95％的同源率，其他的序列很大一部分也代表了與果實成熟基因有關。 本研究采用SSH和反向Northern點雜交相結合的方法對番木瓜采后果實中基因表達的變化進行了研究，獲得了67個有明顯表達差異的EST序列，初步分析了番木瓜采后成熟與品質形成的遺傳學基礎，并得到了一批未知的新基因片段，為克隆和鑒定新功能基因奠定