番木瓜環(huán)斑病毒外殼蛋白基因反向重復(fù)結(jié)構(gòu)表達(dá)載體的轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文番木瓜環(huán)斑病毒外殼蛋白基因反向重復(fù)結(jié)構(gòu)表達(dá)載體的轉(zhuǎn)基因研究StudyonTransformationof八甲ayaRin羅甲o(hù)t巧rusCoatProteinGeneinvertedrePeatsExPressionVeetor研究生:王莉指導(dǎo)教師:姜玲教授指導(dǎo)小組:羅正榮教授蔡禮鴻教授胡春根教授劉繼紅教授伊華林教授專業(yè):果樹學(xué)獲得學(xué)位名稱:農(nóng)學(xué)碩士研究方向:果樹生物技術(shù)獲得學(xué)位時(shí)間:2009年6月華中農(nóng)業(yè)

2、大學(xué)園藝林學(xué)學(xué)院二00九年六月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2009屆碩士學(xué)位論文2.2.5.1合子胚準(zhǔn)備……142.5.5.3番木瓜胚性愈傷誘導(dǎo)……142.5.5.4農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化番木瓜胚性愈傷過(guò)程，，……152.2.6擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化……152.2.7轉(zhuǎn)基因植物總DNA的提取……162.2.8PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株……162.2.9Southemblot印跡分析……172.2.9.1基因組DNA的提取……172.2.9.2基因組DNA的限制性酶切……172

3、.2.9.3電泳及轉(zhuǎn)膜……172.2.9.4探針的制備……172.2.9.5雜交……182.2.9.6顯色，，……182.2.IONthemblot分析……182.2.10.1器皿和容器的處理……182.2.10.2煙草總RNA的提取……192.2.10.3甲醛變性電泳……192.2.10.4RNA轉(zhuǎn)膜……192.2.10.5雜交……202.2.11轉(zhuǎn)基因植株的抗病性鑒定……203結(jié)果與分析……213.1煙草遺傳轉(zhuǎn)化，，……213.1.

4、1轉(zhuǎn)基因煙草PCR的檢測(cè)……213.1.1.1表達(dá)載體pGA一GFP轉(zhuǎn)化煙草PCR鑒定……213.1.1.2表達(dá)載體pHelsgate12一CPIR轉(zhuǎn)化煙草PCR鑒定……223.1.2表達(dá)載體pHelsgate12一CPIR轉(zhuǎn)基因煙草Southemblot分析……243.1.3表達(dá)載體pHelsgatelZ一cPIR轉(zhuǎn)基因煙草Nthemblot分析……243.1.4轉(zhuǎn)基因植株的抗病性檢測(cè)……253.2擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化，，……263.3番木