抵抗素對人臍靜脈內(nèi)皮細胞組織因子及其途徑抑制物表達的調(diào)節(jié).pdf

1、背景：近年來以中心性肥胖、胰島素抵抗為主要特征的代謝綜合征（metabolic syndrome,MetS ）發(fā)病率逐年升高。代謝綜合征患者處于血栓前狀態(tài)，直接增加動靜脈血栓發(fā)病風險，但發(fā)病機制尚未完全闡明。組織因子（tissue factor,TF ）是外源性凝血啟動的關(guān)鍵因子，組織因子途徑抑制物（tissue factor pathway inhibitor,TFPI ）是目前發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)最強的生理性抗凝物質(zhì)，是TF 直接的生理性抑制

2、物，在調(diào)節(jié)TF 誘導的血栓形成中發(fā)揮重要作用。本實驗觀察脂肪細胞因子之一的抵抗素（resist in,R ）對TF 及TFPI的調(diào)節(jié)作用，從對凝血與抗凝系統(tǒng)活性因子的調(diào)節(jié)角度探討代謝綜合征患者易患血栓性疾病的原因及機制。
　　 目的：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs ），觀察不同濃度不同時間抵抗素處理后TF和TFPI 蛋白及mRNA 表達的變化，

3、并探討抵抗素是否能夠通過細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinases,ERK ）、c-Jun 氨基末端激酶（the c-Jun NH2-terminal kinases,JNKs ）及絲裂原活化蛋白激酶p38（p38 MAPK ）通路來調(diào)節(jié)人臍靜脈內(nèi)皮細胞TFPI的表達。
　　 方法
　　 （1 ）將體外培養(yǎng)的4-5代人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs ）分為單純培養(yǎng)基對照

4、組、不同濃度抵抗素（10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL ）組，培養(yǎng)48h后，1 ）MTT法檢測細胞活性；2 ）ELISA 法測各組細胞裂解產(chǎn)物中的TF 蛋白含量及上清液中總TFPI蛋白含量，real-time RT-PCR檢測各組TF mRNA 及TFPI mRNA 表達；
　　 （2 ）將HUVECs 4-5代分為單純培養(yǎng)基對照組、抵抗素（50ng/mL ）組、ERK 磷酸化抑制劑PD98059（

5、10μmol/L ）組、JNK 磷酸化抑制劑SP600125（2.5μmol/L ）組、p38磷酸化抑制劑SB203580（10μmol/L ）組及各組抑制劑預處理組，分別培養(yǎng)48h后用ELISA法測各組細胞上清液中總TFPI 蛋白含量。
　　 結(jié)果
　　 （1 ）各濃度抵抗素對HUVECs的細胞活力沒有明顯影響（p>0.05 ）；（2 ）25ng/mL及50ng/mL 抵抗素在6h 可顯著增加TF 蛋白的水平（p<0.

6、05 ），以50ng/mL 作用最顯著，24h和48h 沒有明顯影響（p>0.05 ），50ng/mL 抵抗素對HUVECs 表達TF mRNA 無明顯作用（p>0.05 ）；（3 ）50ng/mL 抵抗素在24h，25ng/mL、50ng/mL 及100ng/mL 抵抗素在48h 可顯著降低TFPI 蛋白水平（p<0.05 ），以48h 50ng/mL 作用最顯著，但50ng/mL 抵抗素對TFPImRNA 表達無明顯影響（p>0.0