脂朕素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分泌趨化因子和粘附分子表達的影響.pdf

1、目的:脂聯(lián)素是新近發(fā)現(xiàn)的一種由脂肪組織特異性分泌的脂肪因子，具有增加胰島素敏感性、抗炎、抗動脈粥樣硬化等作用，體內(nèi)脂聯(lián)素水平與諸多炎癥性疾病，特別是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病進程密切相關(guān)。然而，關(guān)于脂聯(lián)素抗動脈粥樣硬化的機制有待進一步深入研究。
　　 本研究探討了脂聯(lián)素對腫瘤壞死因子(TNF-α)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)分泌趨化因子白細(xì)胞介素-8(IL-8)、單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)以及粘附分子血管粘附分子

2、-1(VCAM-1)，細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)和內(nèi)皮細(xì)胞選擇素(E-selectin)的影響，進一步明確其抗動脈粥樣硬化機制。
　　 方法:
　　 1、收集新生兒臍靜脈并分離培養(yǎng)HUVECs，采用標(biāo)記鏈霉素抗生物素-生物素法(labeled streptomycin avidin-biotin method，LSAB法)熒光染色檢測內(nèi)皮細(xì)胞特有的Ⅷ因子相關(guān)抗原以鑒定確為HUVECs。
　　 2、將HUV

3、ECs 隨機分為對照組、TNF-α刺激組(分別以5、10、20、50μg/L TNF-α刺激)和脂聯(lián)素干預(yù)組(以5、30、50mg/L 脂聯(lián)素進行干預(yù)，然后加入終濃度為20μg/L的TNF-α)。
　　 3、分別采用RT-PCR 及ELISA法檢測各組IL-8 及MCP-1的mRNA和蛋白表達水平。
　　 4、用RT-PCR 方法檢測脂聯(lián)素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞VCAM-1，ICAM-1和E-selectin mRNA 表達

4、的影響。
　　 5、采用SPSS13.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，以p<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，以p<0.01為統(tǒng)計學(xué)差異明顯。
　　 結(jié)果:
　　 1、熒光染色結(jié)果顯示HUVECs 胞質(zhì)中Ⅷ因子相關(guān)抗原陽性，證實是血管內(nèi)皮細(xì)胞。
　　 2、HUVECs 經(jīng)TNF-α刺激后，TNF-α刺激組IL-8 及MCP-1的蛋白和mRNA 表達水平明顯高于對照組(P<0.01)，且隨著TNF-α濃度的增加，MC

5、P-1和IL-8的蛋白表達量也呈增加趨勢。與20μg/L TNF-α刺激組相比，5mg/L的脂聯(lián)素干預(yù)組IL-8 及MCP-1的蛋白、mRNA 表達無顯著差異；但30、50mg/L 脂聯(lián)素干預(yù)組IL-8 及MCP-1的蛋白、mRNA 表達明顯減弱(P<0.01)。
　　 3、HUVECs 經(jīng)TNF-α刺激6h 后其VCAM-1，ICAM-1和E-selectin mRNA 表達較對照組相比明顯增強(P＜0.05)；脂聯(lián)素預(yù)干預(yù)后