睪酮在炎癥狀態(tài)下對人臍靜脈內皮細胞組織因子途徑抑制物表達的調節(jié)及機制.pdf

1、背景:
　　急性冠脈綜合征(ACS)是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)的危重癥,盡管其發(fā)病存在明顯的性別差異,但雄激素在冠心病中的作用一直存在爭議,是目前心血管領域的研究熱點之一;研究證實血管內皮抗凝活性降低、血栓形成是急性冠脈綜合征的主要特征。我們前期實驗發(fā)現(xiàn)生理濃度睪酮(Testosterone, T)可促進人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)重要抗凝物質組織因子途徑抑制物(TFPI)的表達,并且可以調節(jié)包括核因子-kappaB(

2、NF-κB)在內的多個轉錄因子的活性。NF-κB是炎癥過程的重要介質,其活化所誘導的炎癥因子表達在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)致炎因子諸如腫瘤壞死因子-alpha(TNF-α)可以調節(jié)包括凝血啟動因子——組織因子(TF)在內的多個血栓因子活性,且對部分因子的調節(jié)是通過活化NF-κB途徑實現(xiàn),由此可見睪酮及TNF-α對NF-κB活性均有調節(jié)作用,然而睪酮是否可以干預TNF-α誘導的炎癥狀態(tài)下抗凝因子TFPI的表達從而促

3、進內皮細胞炎癥狀態(tài)下的抗凝活性,并且其調節(jié)是否通過核轉錄因子NF-κB通路實現(xiàn)目前尚未見報道,本實驗即對上述問題進行探討。
　　目的:
　　通過體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞,觀察生理濃度睪酮、TNF-α處理后TFPI表達及NF-κB活性的變化,探討生理濃度睪酮對TNF-α介導的炎癥狀態(tài)下內皮細胞TFPI表達的調節(jié)作用及其機制。
　　方法:
　　(1)將體外培養(yǎng)的3-4代人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)分為空白組(無細胞

4、組)、單純培養(yǎng)基對照組、生理濃度睪酮(30nmol/L)組、TNF-α(10ng/mL)組、TNF-α(20ng/mL)組以及后兩者分別與睪酮共同作用組,培養(yǎng)48h后用MTT方法檢測細胞活性;(2)HUVEC3-4代分為單純培養(yǎng)基對照組、生理濃度睪酮(30nmol/L)組、TNF-α(20ng/mL)組以及兩者共同作用組,培養(yǎng)48h后ELISA法測各組上清液中總TFPI蛋白含量, real-time RT-PCR檢測各組TFPI mRN

5、A表達;(3)生理濃度睪酮(30nmol/L)、TNF-α(20ng/mL)分別干預以及共同作用于HUVEC12h后,應用電泳遷移率變動分析(EMSA)技術,檢測NF-κB活性變化。
　　結果:
　　(1)睪酮及各濃度TNF-α分別作用或共同干預48小時對臍靜脈內皮細胞活性沒有明顯影響;(2)TNF-α(20ng/mL)可顯著下調TFPI mRNA和蛋白的水平(P<0.001),而生理濃度睪酮(30nmol/L)可減輕TNF

6、-α對TFPI表達的抑制作用(P<0.05);(3)TNF-α(20ng/mL)可以明顯激活NF-κB(P<0.05),而生理濃度睪酮(30nmol/L)不但可以單獨抑制NF-κB活性而且可以減弱TNF-α對NF-κB的活化作用(P<0.05)。
　　結論:
　　在人臍靜脈內皮細胞,致炎因子TNF-α可以抑制TFPI的表達;而生理濃度睪酮可減弱TNF-α對TFPI表達的抑制,從而發(fā)揮了其在炎癥狀態(tài)下防止血栓形成的作用;而該作