睪酮對人血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子途徑抑制物表達(dá)調(diào)節(jié)的細(xì)胞內(nèi)通路.pdf

1、背景
　　急性冠脈綜合征(Acute Coronary Syndrome, ACS)是冠心病的危重癥,其發(fā)病存在明顯的性別差異。即使考慮其他危險因素,男性性別仍是冠心病的獨(dú)立危險因子,而雄激素的作用一直存在爭議,是目前心血管領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。研究證實(shí)血管內(nèi)皮抗凝活性降低,血栓形成是急性冠脈綜合征的主要特征,而我們的前期實(shí)驗發(fā)現(xiàn)生理濃度睪酮(Testosterone, T)可通過雄激素受體(Androgen Receptor, A

2、R)促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell, HUVEC)合成、分泌組織因子途徑抑制物(Tissue Factor Pathway Inhibitor,TFPI),增強(qiáng)內(nèi)皮抗凝活性,但是其具體機(jī)制不明,本實(shí)驗即是對該調(diào)節(jié)通路的進(jìn)一步研究。
　　目的
　　觀察生理濃度睪酮處理后,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子(Nuclear Factor, NF)活性變化及對 TFPI表達(dá)

3、合成的影響,探討生理濃度睪酮在轉(zhuǎn)錄因子(Transcription Factor, TF)環(huán)節(jié)調(diào)節(jié)TFPI表達(dá)的機(jī)制。
　　方法
　　(1)將體外培養(yǎng)的人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)分為單純培養(yǎng)基對照組、生理濃度睪酮組和雄激素受體拮抗劑(Flutamide, F)預(yù)處理組,應(yīng)用轉(zhuǎn)錄因子活性芯片技術(shù),分析三組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子活性的差異;
　　(2)將體外培養(yǎng)的HUVEC細(xì)胞分為單純培養(yǎng)基對照組(Contro

4、l組)、不同濃度睪酮組(3×10-9,3×10-8,3×10-6,3×10-5mol/L Testosterone組:T-9組, T-8組,T-6組,T-5組)、Flutamide組(F組)、Flutamide預(yù)處理組(F+T-8組)、TNF-α處理組(TNF-α組)、TNF-α預(yù)處理組(TNF-α+T-8組)、PFT-α處理組(PFT-α組)、PFT-α預(yù)處理組(PFT-α+T-8組),ELISA法測各組TFPI蛋白水平,real-t

5、ime RT-PCR檢測各組TFPI mRNA水平。
　　結(jié)果
　　(1)睪酮作用后有5個轉(zhuǎn)錄因子的活性明顯變化,其中活性明顯上調(diào)的轉(zhuǎn)錄因子有3個,包括c-Myb、Myc和P53;顯著下調(diào)的轉(zhuǎn)錄因子有2個,包括核因子κb(NF-κb)和SP1;Flutamide能有效消除睪酮的上述作用;
　　(2)生理濃度睪酮(3×10-8 mol/L)組TFPI蛋白與mRNA水平與對照組相比明顯增加,而超生理濃度睪酮(3×10-5

6、mol/L)組則明顯低于對照組, Flutamide可消除上述作用;通過TNF-α上調(diào)NF-κb和SP1活性后,TFPI的表達(dá)明顯受到抑制,生理濃度睪酮可抑制TNF-α的這種作用;而PFT-α增加TFPI的表達(dá),與生理濃度睪酮共同作用后,TFPI的表達(dá)進(jìn)一步增加。
　　結(jié)論
　　(1)生理濃度睪酮可通過雄激素受體使 HUVEC核轉(zhuǎn)錄因子 c-Myb、Myc-Max、P53的活性上調(diào),同時使NF-κb和SP1的活性下調(diào);