鼠傷寒沙門氏菌刺激對(duì)雞十二指腸上皮細(xì)胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、小腸不僅是一個(gè)消化和吸收的場所，也是一個(gè)機(jī)體免疫的場所。小腸上皮細(xì)胞的增殖和凋亡的動(dòng)態(tài)平衡，維持了腸黏膜屏障的完整性。臨床上沙門氏菌感染誘導(dǎo)腸炎，導(dǎo)致小腸上皮細(xì)胞的凋亡和增殖產(chǎn)生紊亂，小腸功能遭到破壞。哺乳動(dòng)物中研究發(fā)現(xiàn)，沙門氏菌細(xì)胞壁的主要成分脂多糖(Lipopolysacride，LPS)可激活TLR4信號(hào)通路，促進(jìn)小腸上皮細(xì)胞凋亡，同時(shí)抑制細(xì)胞增殖。然而，關(guān)于沙門氏菌感染時(shí)TLR4對(duì)雞小腸上皮細(xì)胞增殖與凋亡的影響還未見相關(guān)報(bào)道。因

2、此，本研究以1日齡科寶肉雞為研究對(duì)象，采用LPS或鼠傷寒沙門氏菌刺激誘導(dǎo)雞十二指腸上皮細(xì)胞的增殖與凋亡平衡紊亂，研究TLR4在雞十二指腸內(nèi)的分布及表達(dá)變化規(guī)律，探索TLR4與鼠傷寒沙門氏菌感染破壞腸上皮細(xì)胞增殖與凋亡平衡間的關(guān)系。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.LPS或鼠傷寒沙門氏菌刺激對(duì)雞十二指腸上皮細(xì)胞增殖的影響為了研究沙門氏菌刺激對(duì)雞十二指腸上皮細(xì)胞增殖的影響，本試驗(yàn)采用LPS刺激模擬細(xì)菌感染，或采用鼠傷寒沙門氏菌感染，采

3、用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，分別研究了LPS刺激或鼠傷寒沙門氏菌刺激后PCNA在雞十二指腸內(nèi)的分布及表達(dá)變化規(guī)律。研究結(jié)果顯示:PCNA主要分布于十二指腸的黏膜層，在黏膜下層、肌層和漿膜層也有分布，主要分布于細(xì)胞核中。黏膜層的上皮、固有層及腸腺附近分布有大量的陽性細(xì)胞。LPS或鼠傷寒沙門氏菌刺激后雞十二指腸內(nèi)PCNA的表達(dá)量均降低。與對(duì)照組相比，LPS刺激后12h、72h和120h時(shí)，PCNA表達(dá)量顯著降低(p＜0.05);鼠傷寒沙門氏菌刺

4、激后6h、12h、24h、36h、72h和120h時(shí)，PCNA的表達(dá)量均顯著降低(p＜0.05)。以上研究結(jié)果表明，當(dāng)鼠傷寒沙門氏菌侵入機(jī)體時(shí)，抑制腸上皮細(xì)胞增殖，損傷腸黏膜屏障功能。
　　2.LPS或鼠傷寒沙門氏菌刺激對(duì)雞十二指腸上皮細(xì)胞凋亡的影響為了研究沙門氏菌刺激對(duì)雞十二指腸上皮細(xì)胞凋亡的影響，本試驗(yàn)采用LPS刺激模擬細(xì)菌感染，或采用鼠傷寒沙門氏菌感染，采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，分別研究了LPS刺激或鼠傷寒沙門氏菌刺激后an

5、ti-DNA在雞十二指腸內(nèi)的分布及表達(dá)變化規(guī)律。研究結(jié)果顯示:凋亡細(xì)胞主要分布于十二指腸的黏膜層，在黏膜下層、肌層和漿膜層也有分布。黏膜層的上皮、固有層及腸腺附近分布有大量的陽性細(xì)胞。LPS或鼠傷寒沙門氏菌刺激后雞十二指腸內(nèi)anti-DNA的表達(dá)量均升高。與對(duì)照組相比，LPS刺激后12h和24h時(shí)，細(xì)胞凋亡顯著增強(qiáng)(p＜0.05);鼠傷寒沙門氏菌刺激后12h、24h和36h時(shí)，細(xì)胞凋亡顯著增強(qiáng)(p＜0.05)。以上研究結(jié)果表明，當(dāng)鼠傷寒

6、沙門氏菌入侵機(jī)體時(shí)，促進(jìn)腸上皮細(xì)胞凋亡，破壞腸黏膜屏障功能。
　　3.LPS或鼠傷寒沙門氏菌刺激對(duì)雞十二指腸內(nèi)TLR4表達(dá)的影響為了研究沙門氏菌刺激對(duì)雞十二指腸上皮細(xì)胞內(nèi)TLR4的影響，本試驗(yàn)采用LPS刺激模擬細(xì)菌感染，或采用鼠傷寒沙門氏菌感染，采用免疫組織化學(xué)染色和Q-PCR技術(shù)，分別研究了LPS刺激或鼠傷寒沙門氏菌刺激后TLR4在雞十二指腸內(nèi)的分布及表達(dá)變化規(guī)律。研究結(jié)果顯示:TLR4主要分布于十二指腸的黏膜層，在黏膜下層、肌

7、層和漿膜層較少分布。黏膜層的上皮、固有層及腸腺附近分布有大量的陽性細(xì)胞。LPS或鼠傷寒沙門氏菌刺激后雞十二指腸內(nèi)TLR4的表達(dá)量均升高。與對(duì)照組相比，LPS刺激后2h、12h和72h時(shí)，TLR4的表達(dá)量顯著增多(p＜0.05);鼠傷寒沙門氏菌刺激后6h、12h、24h、36h和72h時(shí)，TLR4的表達(dá)量顯著增多(p＜0.05)。以上研究結(jié)果表明，當(dāng)鼠傷寒沙門氏菌侵入機(jī)體時(shí)，可通過激活TLR4來破壞十二指腸上皮細(xì)胞增殖與凋亡平衡，影響腸黏