Ⅰ型菌毛對鼠傷寒沙門氏菌體內(nèi)侵襲能力的影響.pdf

1、沙門氏菌(Salmonella)為腸桿菌科沙門氏菌屬成員，是一類條件性細胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性腸桿菌，血清型眾多，是人與動物的重要致病菌。 沙門氏菌菌毛是細菌表面的纖細結(jié)構(gòu)，與細菌粘附上皮細胞及在小腸粘膜定植有關(guān)。Ⅰ型菌毛是靜止培養(yǎng)時唯一表達的菌毛，其結(jié)構(gòu)與功能是各種菌毛中研究最為清楚的一種。前期體外研究證明，沙門氏菌Ⅰ型菌毛與細菌粘附與侵襲宿主細胞有關(guān)。本研究在此基礎(chǔ)上，進一步體內(nèi)研究，以小鼠為模型，通過LD50與侵襲試驗，證實

2、鼠傷寒沙門氏菌Ⅰ型菌毛對細胞毒力的影響。 本研究針對沙門氏菌Ⅰ型菌毛進行的研究主要有以下幾個方面： 1.把質(zhì)粒穩(wěn)定系統(tǒng)hok-aphA-parDE成功克隆到能表達沙門氏菌Ⅰ型菌毛的pACYC184載體上，經(jīng)測序確定hok-aphA-parDE序列與GenBank上公布的相應(yīng)序列具有100％的同源性。測定了質(zhì)粒穩(wěn)定系統(tǒng)hok-aphA-parDE對質(zhì)粒穩(wěn)定性的作用。結(jié)果顯示，沒有質(zhì)粒穩(wěn)定系統(tǒng)的質(zhì)粒在細菌培養(yǎng)12-24h后開

3、始丟失，而含穩(wěn)定系統(tǒng)的質(zhì)粒在連續(xù)培養(yǎng)10代或120h都未發(fā)生丟失。這證明aphA-hok-parDE序列顯著增強了質(zhì)粒的穩(wěn)定性。 2.用半數(shù)致死量(LD<,50>)檢測沙門氏菌Ⅰ型菌毛對細菌毒力的影響。把能表達沙門氏菌Ⅰ型菌毛的質(zhì)粒和不能表達沙門氏菌Ⅰ型菌毛的質(zhì)粒同時轉(zhuǎn)入已經(jīng)缺失了invA基因、lpfC基因和Ⅰ型菌毛fim基因的鼠傷寒沙門氏菌中，同時測定這兩種細菌的LD<,50>。結(jié)果顯示，能表達沙門氏菌Ⅰ型菌毛的細菌毒力顯著下

4、降，其半數(shù)致死量較不能表達沙門氏菌Ⅰ型菌毛的細菌高76倍。 3.把能表達沙門氏菌Ⅰ型菌毛的細菌和不能表達沙門氏菌Ⅰ型菌毛的細菌等量混合后對BALB/c小鼠灌胃接種，不同時間段撲殺小鼠，以細菌計數(shù)法檢測血液，PPS(派伊爾氏結(jié))，腸系膜淋巴結(jié)，肝臟和脾臟各器官中這兩種細菌的數(shù)目，從而揭示了沙門氏菌Ⅰ型菌毛在細菌體內(nèi)侵襲中所起的作用，同時也揭示了細菌在體內(nèi)擴散的相關(guān)規(guī)律。經(jīng)過多次重復(fù)試驗顯示，能表達沙門氏菌Ⅰ型菌毛的細菌侵襲能力相對