體外培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：提取神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者外周血分離出單核細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)、誘導(dǎo)產(chǎn)生樹突狀細(xì)胞，并探討細(xì)胞因子對樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)、分化成熟的影響，為最終臨床應(yīng)用樹突狀細(xì)胞免疫治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤打下基礎(chǔ)。 方法：臨床收集確診為神經(jīng)膠質(zhì)瘤的患者靜脈血共20份，每份20ml，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液梯度分離出單個核細(xì)胞（PBMC），貼壁法獲得單核細(xì)胞后，每個樣本均分為兩份，共兩組，分別加入GM-CSF+IL-4和GM-CSF+IL-4+Flt3-L進(jìn)行誘導(dǎo)，在相同

2、條件下進(jìn)行體外培養(yǎng)，隔日半量換液，補(bǔ)充細(xì)胞因子，共7天，用倒置顯微鏡觀察其形態(tài)，并進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測其表面標(biāo)志，對培養(yǎng)結(jié)果在獲得率、純度和細(xì)胞表型三方面進(jìn)行對比。 結(jié)果：應(yīng)用GM-CSF+IL-4和GM-CSF+IL-4+Flt3-L兩種培養(yǎng)方法均可誘導(dǎo)產(chǎn)生樹突狀細(xì)胞,而且在樹突狀細(xì)胞的獲得率和純度方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測，應(yīng)用GM-CSF+IL-4組所獲得的樹突狀細(xì)胞符合不成熟樹突狀細(xì)胞的表型，而GM-CSF+IL-