外周血單核細(xì)胞來(lái)源的樹突狀細(xì)胞體外培養(yǎng)及抗原負(fù)載策略性研究.pdf

1、第一部分樹突狀細(xì)胞體外培養(yǎng)條件的優(yōu)化目的:探討改善外周血來(lái)源的樹突狀細(xì)胞(DC)體外培養(yǎng)的方法,以促進(jìn)DC的成熟并提高其遞呈抗原和激發(fā)特異性免疫反應(yīng)的能力.方法:用貼壁的外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)在含有粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulatingfactor,GM-CSF)和白細(xì)胞介素-4(IL-4)的

2、含10％FBS的RPMI1640培養(yǎng)基體外培養(yǎng)至第5天.再分為三種條件(1)TNF-α+CD40L(2)TNF-α+CD40L+HSP70(3)TNF-α+CD40L+HSP70和GM-CSF連接物促進(jìn)其成熟,用流式細(xì)胞儀鑒定表型,并進(jìn)行功能檢測(cè),以比較幾種因子在DC體外培養(yǎng)的作用.結(jié)論:HSP、HSP和GM-CSF連接物是體外培養(yǎng)DC的重要因子,可促進(jìn)DC的成熟,成熟標(biāo)志物CD83明顯高于TNF-α+CD40L組.HSP-70以及HS

3、P-70與GM-CSF的交聯(lián)物可提高DC誘導(dǎo)T細(xì)胞活化的能力,.第二部分凋亡細(xì)胞及細(xì)胞裂解物作為負(fù)載抗原制備腫瘤疫苗的研究目的:比較凋亡的腫瘤細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞裂解物作為抗原,經(jīng)DC細(xì)胞遞呈,體外誘導(dǎo)自體T細(xì)胞產(chǎn)生的CTL對(duì)相應(yīng)靶細(xì)胞的特異性殺傷作用,以尋找更為有效的抗原制備方法.方法:<'137>Cs照射和MMC處理后凋亡的腫瘤細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞裂解物作為抗原,經(jīng)自體DC遞呈后刺激相對(duì)應(yīng)的T細(xì)胞產(chǎn)生CTL,LDH(乳酸脫氫酶)法對(duì)相應(yīng)抗原的靶