麗江云杉體胚發(fā)生及特異蛋白的研究.pdf

1、細(xì)胞全能性是指植物細(xì)胞具有全套遺傳信息，不論是性細(xì)胞還是體細(xì)胞，在特定環(huán)境下能進(jìn)行表達(dá)，而產(chǎn)生一個(gè)獨(dú)立完整的個(gè)體。體胚發(fā)生是植物細(xì)胞全能性的一種表達(dá)方式。作為20世紀(jì)后期植物組織培養(yǎng)技術(shù)中的一個(gè)重大突破，體胚發(fā)生技術(shù)無(wú)論在理論研究還是實(shí)際應(yīng)用方面都具有非常重要的意義。
　　 針葉樹(shù)種在世界范圍內(nèi)分布很廣，在整個(gè)林木類(lèi)群中占有非常重要的地位，但由于樹(shù)種的特性，它們的體細(xì)胞胚胎發(fā)生被認(rèn)為是難度最大的，但其中云杉屬樹(shù)種的體胚發(fā)生相對(duì)容

2、易，而成為針葉樹(shù)種體胚發(fā)生研究的模式樹(shù)種。
　　 本論文以云南有分布的唯一云杉屬樹(shù)種麗江云杉(Picea Likiangensis)成熟胚為外植體，分別從不同基本培養(yǎng)基、不同外源激素組合、不同基因型等方面探討了其胚性愈傷誘導(dǎo)的情況，獲得其胚性愈傷誘導(dǎo)、增殖、體胚成熟和萌發(fā)等階段的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，同時(shí)測(cè)定并分析了麗江云杉體胚發(fā)育各階段材料的可溶性蛋白含量及特異蛋白組分，研究為進(jìn)一步開(kāi)展其它針葉樹(shù)種的體胚發(fā)生技術(shù)及探索體胚發(fā)生分子

3、機(jī)理奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下：
　　 1、獲得了7個(gè)不同單株共331個(gè)麗江云杉體細(xì)胞胚胎發(fā)生的胚性愈傷組織，為麗江云杉體胚快繁，針葉樹(shù)種體胚發(fā)生機(jī)理和遺傳轉(zhuǎn)化研究提供充分材料。
　　 2、建立了麗江云杉體胚發(fā)生體系。(1)胚性愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基：1/2LM+2，4-D3mg.L.1+BA1.5mg-L-1；(2)胚性愈傷增殖擴(kuò)繁保持培養(yǎng)基：與誘導(dǎo)培養(yǎng)基相同；(3)體胚成熟培養(yǎng)基：1/2LM+ABA(60mg/l)+PEG(7.

4、5％)；(4)體胚萌發(fā)培養(yǎng)基：DCR+AC(0.2％)。暗中，室溫或21-23℃中培養(yǎng)。
　　 3、胚性愈傷組織的誘導(dǎo)研究表明：不同基本培養(yǎng)基、激素組合、基因型其胚性愈傷組織誘導(dǎo)的結(jié)果截然不同。誘導(dǎo)胚性愈傷組織的較適培養(yǎng)基為1/2LM+2，4-D3mg·L-1+BA1.5mg·L-1，誘導(dǎo)率可達(dá)15.37％。
　　 4、采用考馬斯亮藍(lán)G-250法測(cè)定了非胚性愈傷組織、胚性愈傷組織和體胚4個(gè)發(fā)育階段(球形胚、心形胚、魚(yú)雷胚

5、及子葉胚)的總蛋白質(zhì)相對(duì)含量，分析并獲得其可溶性蛋白含量的動(dòng)態(tài)變化特征。
　　 5、采用SDS-PAGE凝膠電泳對(duì)上述材料進(jìn)行了特異蛋白組分的分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：非胚性愈傷組織有94KD、64KD、31KD特異蛋白的表達(dá)；胚性愈傷組織的特異蛋白包括96KD、63KD、58KD、35KD蛋白；體胚發(fā)育特異蛋白有60KD、58KD、45KD蛋白。研究結(jié)果將有助于進(jìn)一步探索針葉樹(shù)種體胚再生基因調(diào)控的分子機(jī)理，以及外界因子對(duì)其調(diào)控機(jī)制，為針