不同取材時期水曲柳合子胚DNA甲基化及體胚發(fā)生狀態(tài).pdf

1、水曲柳(Fraxinus mandshurica)是我國東北地區(qū)珍貴的三大硬闊樹種之一,是重要的用材樹種。本研究通過對不同取材時期的水曲柳合子胚子葉進行誘導體胚；并通過在培養(yǎng)基中添加5-氮胞苷誘導水曲柳體胚發(fā)生；同時使用MSAP技術測定不同取材時期的水曲柳合子胚子葉以及外植體的基因組DNA甲基化狀態(tài)來研究其與水曲柳體胚發(fā)生的關系。為深入解析水曲柳體細胞胚胎發(fā)生與外植體基因組DNA甲基化狀態(tài)的關系奠定基礎,為水曲柳體細胞胚胎發(fā)生發(fā)育的精細

2、調(diào)控提供科學依據(jù)。研究結(jié)果如下:
　　 (1)以不同取材時期水曲柳合子胚子葉為外植體誘導體胚發(fā)生,在7月下旬的體胚誘導率最高:而愈傷組織誘導率的最高值出現(xiàn)在7月中、下旬,并與其他時期相比差異顯著(p<0.05)。因此,確定7月下旬為水曲柳體胚發(fā)生的最佳時期。
　　 (2)通過MSAP技術,建立了水曲柳合子胚子葉基因組DNA甲基化的檢測體系。通過檢測不同取材時期水曲柳合子胚基因組在CCGG位點的胞嘧啶甲基化水平,每個時期基

3、因組DNA分別獲得933～939條清晰可辨的PAGE譜帶。在7月下旬甲基化條帶最少,各個時期的甲基化差異不顯著。在7月下旬,DNA甲基化水平最低,而其體胚誘導率確實最高。
　　 (3)培養(yǎng)基中添加5-氮胞苷對水曲柳體胚發(fā)生的外植體狀態(tài)的比率有影響,但不影響外植體狀態(tài)的種類。不同濃度的5-氮胞苷對水曲柳體胚發(fā)生數(shù)影響差異不顯著,對畸形胚發(fā)生數(shù)影響差異顯著。其中,20.0μmol/L的5-氮胞苷明顯促進畸形胚發(fā)生數(shù)的增加。5-氮胞苷

4、會明顯抑制水曲柳外植體的褐化、愈傷組織的誘導以及體胚發(fā)生,不同濃度的5-氮胞苷的抑制效果不同,但都與對照差異顯著(p<0.05)。其中,0.5μmol/L的5-氮胞苷的抑制強度最大。
　　 (4)不同培養(yǎng)時間添加20.0μmol/L的5-氮胞苷,在第1 d加入促進水曲柳體胚發(fā)生數(shù)及畸形胚發(fā)生數(shù)的增加,且與其他處理差異顯著(p<0.05):且抑制水曲柳外植體褐化；顯著提高水曲柳愈傷組織誘導率,在其他培養(yǎng)時間加入20.0μmol/L