不同取材時(shí)期水曲柳合子胚DNA甲基化及體胚發(fā)生狀態(tài).pdf

1、水曲柳(Fraxinus mandshurica)是我國東北地區(qū)珍貴的三大硬闊樹種之一,是重要的用材樹種。本研究通過對(duì)不同取材時(shí)期的水曲柳合子胚子葉進(jìn)行誘導(dǎo)體胚；并通過在培養(yǎng)基中添加5-氮胞苷誘導(dǎo)水曲柳體胚發(fā)生；同時(shí)使用MSAP技術(shù)測定不同取材時(shí)期的水曲柳合子胚子葉以及外植體的基因組DNA甲基化狀態(tài)來研究其與水曲柳體胚發(fā)生的關(guān)系。為深入解析水曲柳體細(xì)胞胚胎發(fā)生與外植體基因組DNA甲基化狀態(tài)的關(guān)系奠定基礎(chǔ),為水曲柳體細(xì)胞胚胎發(fā)生發(fā)育的精細(xì)

2、調(diào)控提供科學(xué)依據(jù)。研究結(jié)果如下:
　　 (1)以不同取材時(shí)期水曲柳合子胚子葉為外植體誘導(dǎo)體胚發(fā)生,在7月下旬的體胚誘導(dǎo)率最高:而愈傷組織誘導(dǎo)率的最高值出現(xiàn)在7月中、下旬,并與其他時(shí)期相比差異顯著(p<0.05)。因此,確定7月下旬為水曲柳體胚發(fā)生的最佳時(shí)期。
　　 (2)通過MSAP技術(shù),建立了水曲柳合子胚子葉基因組DNA甲基化的檢測體系。通過檢測不同取材時(shí)期水曲柳合子胚基因組在CCGG位點(diǎn)的胞嘧啶甲基化水平,每個(gè)時(shí)期基

3、因組DNA分別獲得933～939條清晰可辨的PAGE譜帶。在7月下旬甲基化條帶最少,各個(gè)時(shí)期的甲基化差異不顯著。在7月下旬,DNA甲基化水平最低,而其體胚誘導(dǎo)率確實(shí)最高。
　　 (3)培養(yǎng)基中添加5-氮胞苷對(duì)水曲柳體胚發(fā)生的外植體狀態(tài)的比率有影響,但不影響外植體狀態(tài)的種類。不同濃度的5-氮胞苷對(duì)水曲柳體胚發(fā)生數(shù)影響差異不顯著,對(duì)畸形胚發(fā)生數(shù)影響差異顯著。其中,20.0μmol/L的5-氮胞苷明顯促進(jìn)畸形胚發(fā)生數(shù)的增加。5-氮胞苷

4、會(huì)明顯抑制水曲柳外植體的褐化、愈傷組織的誘導(dǎo)以及體胚發(fā)生,不同濃度的5-氮胞苷的抑制效果不同,但都與對(duì)照差異顯著(p<0.05)。其中,0.5μmol/L的5-氮胞苷的抑制強(qiáng)度最大。
　　 (4)不同培養(yǎng)時(shí)間添加20.0μmol/L的5-氮胞苷,在第1 d加入促進(jìn)水曲柳體胚發(fā)生數(shù)及畸形胚發(fā)生數(shù)的增加,且與其他處理差異顯著(p<0.05):且抑制水曲柳外植體褐化；顯著提高水曲柳愈傷組織誘導(dǎo)率,在其他培養(yǎng)時(shí)間加入20.0μmol/L