不同因素對牡丹體胚發(fā)生早期誘導(dǎo)的影響.pdf

1、牡丹是中國的特產(chǎn)花卉，但傳統(tǒng)的繁殖方式具有育種周期過長、繁殖系數(shù)低等問題，導(dǎo)致其種植和生產(chǎn)難以形成規(guī)模，不能滿足市場的需求。采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)是牡丹快速繁殖的有效手段之一，不僅可以縮短繁育周期，提高繁殖系數(shù)，有利于大規(guī)模生產(chǎn)，還可以保持母株的優(yōu)良性狀。更重要的是，體外再生培養(yǎng)體系的建立可以為牡丹分子育種及基因改良工程提供理論和技術(shù)平臺。體胚發(fā)生方式再生植株作為組培中一個重要的植物再生方式，在許多木本植物中已經(jīng)取得了成功，但有關(guān)牡丹體胚

2、發(fā)生的研究報道卻不是很多。本研究以牡丹‘鳳丹白'的鱗芽為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)，首先通過研究不同外源激素、金屬銀離子及培養(yǎng)方式對牡丹體胚發(fā)生早期誘導(dǎo)的影響，確定了適于牡丹體胚發(fā)生早期誘導(dǎo)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方式;其次研究最適處理下，牡丹體胚誘導(dǎo)情況，其抗氧化酶(POD、SOD、CAT、APX)活性、可溶性蛋白含量、內(nèi)源激素含量及內(nèi)源激素平衡的變化情況，同時進(jìn)行組織切片觀察;最后通過石蠟切片，觀察牡丹早期體胚發(fā)生過程中的同步化效果。本試驗通過探究牡

3、丹早期體胚發(fā)生的可行條件，希望能夠為今后牡丹體胚發(fā)生體系的建立提供一定的理論與技術(shù)。主要結(jié)論如下:
　　1.以牡丹愈傷組織為試驗材料，研究不同外源激素、金屬銀離子及培養(yǎng)方式對牡丹體胚發(fā)生早期誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明:以不同暗期下添加毒莠定(PIC)的處理誘導(dǎo)的愈傷組織最多，且其外觀形態(tài)表現(xiàn)及細(xì)胞學(xué)觀察均符合胚性愈傷組織的特征。
　　2.以牡丹愈傷組織為試驗材料，研究附加PIC條件下不同暗期處理對牡丹體胚發(fā)生早期誘導(dǎo)的情況。結(jié)果表

4、明，誘導(dǎo)培養(yǎng)的第18d愈傷組織開始形成胚性細(xì)胞，18-30d形成大量的胚性細(xì)胞，第30d左右出現(xiàn)球形胚，第36d可以觀察到心形胚的產(chǎn)生。同時，在胚性愈傷組織的形成過程中，存在非胚性細(xì)胞、胚性細(xì)胞和早期球形胚共存的現(xiàn)象。
　　3.以牡丹愈傷組織為試驗材料，研究附加PIC條件下體胚發(fā)生早期誘導(dǎo)過程中抗氧化物酶活性的變化。結(jié)果表明:POD活性在0-30d迅速上升，且于第30d即球形胚形成期達(dá)到峰值，之后雖略有降低，但仍維持在較高程度;S

5、OD活性在0-18d即胚性愈傷組織時期迅速上升并維持在較高水平，24-30d急速下降且于第30d球形胚時期出現(xiàn)最低值，之后迅速回升;CAT的活性變化趨勢與POD活性的基本一致，0-24d緩慢上升，24-30d即球形胚時期急速升至最高值，30-36d又急劇下降，之后維持在較高水平;APX活性在0-30d緩慢下降且降幅很小，之后開始急速回升。
　　4.以牡丹愈傷組織為材料，研究附加PIC條件下體胚發(fā)生早期誘導(dǎo)過程中可溶性蛋白含量的變化

6、。結(jié)果表明:蛋白質(zhì)合成速率在0-30d明顯加快，于第30d達(dá)到最大值后，其含量開始下降。
　　5.以牡丹愈傷組織為材料，研究附加PIC的條件下體胚發(fā)生早期誘導(dǎo)過程中內(nèi)源激素含量及內(nèi)源激素平衡的變化。結(jié)果表明:內(nèi)源IAA含量在0-30d呈上升趨勢，并于第30d即球形胚的形成時期達(dá)到峰值，之后雖有所下降，但仍維持在較高的水平;內(nèi)源GA3含量在處理前期呈不斷下降的趨勢，但變化幅度不大，并于球形胚和心形胚階段降至最低;內(nèi)源ABA含量的變化