百棉1號(hào)體胚誘導(dǎo)及蛋白質(zhì)變化規(guī)律的研究.pdf

1、棉花體細(xì)胞培養(yǎng)再生體系的建立對(duì)棉花遺傳改良及其生物工程具有重要意義。目前有關(guān)棉花體細(xì)胞培養(yǎng)的報(bào)道已經(jīng)很多，但是這些研究大多集中在少數(shù)的退出生產(chǎn)的模式材料上,推廣良種棉花體細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中體胚誘導(dǎo)一直是個(gè)瓶頸。百棉1號(hào)是生產(chǎn)上正在推廣的國(guó)審棉花新品種，其體細(xì)胞組織培養(yǎng)再生體系還沒(méi)建立，這為百棉1號(hào)的進(jìn)一步轉(zhuǎn)基因改良帶來(lái)不便。本研究以百棉1號(hào)和珂字312下胚軸作為材料，對(duì)其培養(yǎng)條件的進(jìn)行了優(yōu)化，建立了百棉1號(hào)的體胚誘導(dǎo)體系。而當(dāng)前大多數(shù)研究報(bào)

2、道集中在生理生化方面，本文以非胚性愈傷和胚性愈傷為材料，采用SDS-PAGE和雙向電泳技術(shù)，研究了體細(xì)胞胚胎發(fā)生過(guò)程中蛋白質(zhì)的變化規(guī)律及體胚發(fā)生過(guò)程中的特異蛋白，期望為進(jìn)一步完善陸地棉組織培養(yǎng)植株再生體系提供分子生物學(xué)基礎(chǔ)，研究主要結(jié)果如下:
　　 1、百棉1號(hào)體胚誘導(dǎo)體系的建立：
　　 (1)用0.1％升汞對(duì)種子消毒時(shí)間2～3分鐘最佳，此時(shí)的無(wú)菌苗生長(zhǎng)狀態(tài)好，葉片翠綠，0.1％升汞浸泡種子超過(guò)3分鐘后,無(wú)菌苗的長(zhǎng)勢(shì)就受

3、到影響，主要表現(xiàn)在:苗高變矮，葉片上有枯黃色斑點(diǎn)。
　　 (2)2，4-D對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)至關(guān)重要，不添加2，4-D時(shí)，愈傷組織多為白綠色，質(zhì)地致密，呈塊狀，而且出愈傷率較低。2，4-D的濃度在0.05mg/L水平左右最佳,此時(shí)可以獲得大量的愈傷組織。
　　 (3)分別單獨(dú)使用ZT、2,4-D、IBA誘導(dǎo)愈傷時(shí)，沒(méi)有胚性愈傷組織分化出來(lái)，而且愈傷組織增殖也不明顯，大多愈傷組織為淺綠色，底部中間多有褐化現(xiàn)象。
　　

4、(4)利用MSB+2，4-D+ZT組合和MSB+IBA+ZT組合誘導(dǎo)愈傷組織，培養(yǎng)一段時(shí)間后愈傷組織分化成黃灰色，疏松顆粒狀，表面發(fā)亮，濕潤(rùn)的胚性愈傷組織。百棉1號(hào)胚性愈傷的分化率分別為9％和8％，珂字312胚性愈傷的分化率為18％和13％。
　　 (5)利用MSB+2，4-D+IBA+ZT誘導(dǎo)愈傷組織,只有在2，4-D、IBA濃度較低ZT濃度較高時(shí)，才可以分化出胚性愈傷組織，而且分化率很低，百棉1號(hào)分化率為1％，珂字312為分

5、化率2％。
　　 2、百棉1號(hào)體胚發(fā)生過(guò)程中蛋白質(zhì)變化規(guī)律的研究：
　　 (1)采用TCA/丙酮法提取愈傷組織蛋白質(zhì)，測(cè)定其含量，發(fā)現(xiàn)愈傷組織中總蛋白質(zhì)的含量趨勢(shì)是:先升高后降低，在第四、五代達(dá)到高峰。
　　 (2)采用SDS-PAGE單向電泳技術(shù)，分析電泳圖譜，發(fā)現(xiàn)分子量為40KD和42KD的蛋白組分僅僅出現(xiàn)在百棉1號(hào)胚性愈傷中，這兩種蛋白質(zhì)組分與體細(xì)胞胚發(fā)生有密切的聯(lián)系。
　　 (3)采用雙向電泳技術(shù)