轉化生長因子β1誘導的調節(jié)性T細胞抑制炎性骨吸收的研究.pdf

1、本文從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 轉化生長因子β1通過誘導調節(jié)性T細胞新生抑制組織工程軟骨吸收
　　目的:探討轉化生長因子β1(transforming growth factor-betal，TGF-β1)抑制細胞凋亡和組織工程軟骨吸收的機制。
　　方法:我們將TGF-β1基因轉染至骨髓間充質干細胞后與CD4+T細胞，促炎因子干擾素(IFN)-γ和腫瘤壞死因子(TNF)-α共培養(yǎng)，分析骨髓間充質干細胞的形態(tài)

2、學改變，凋亡，軟骨分化能力以及CD4+T細胞的表型變化。
　　結果:加入IFN-γ和TNF-α的培養(yǎng)組骨髓間充質干細胞凋亡和組織工程軟骨吸收明顯多于對照組。與此相反，加入CD4+T細胞的培養(yǎng)組骨髓間充質干細胞凋亡和組織工程軟骨吸收較少，在該組中我們發(fā)現了Foxp3+T細胞和CD25+CD39+T細胞。此外，在未轉染TGF-β1基因的培養(yǎng)組中，檢測不到Ⅱ型膠原、Foxp3+T細胞或CD25+CD39+T細胞。
　　結論: IF

3、N-γ和TNF-α誘導了骨髓間充質干細胞凋亡和組織工程軟骨吸收，但新生的調節(jié)性T(Treg)細胞能夠抑制IFN-γ和TNF-α的功能進而保護種子細胞和組織工程軟骨。TGF-β1不僅發(fā)揮了軟骨誘導作用，同時促使CD4+T細胞轉化為Treg細胞。
　　第二部分 轉化生長因子β1誘導的調節(jié)性T細胞抑制內源性IFN-γ和TNF-α導致的組織工程軟骨吸收
　　目的:探討CD4+T細胞是否能夠分泌內源性IFN-γ和TNF-α，以及它們的

4、功能，并進一步研究誘導的調節(jié)性T細胞(induced Treg cells，iTreg)對于骨髓間充質干細胞和組織工程軟骨的保護作用。另外，我們還將探討在這一共培養(yǎng)體系中TGF-β1的功能。
　　方法:將轉染(或未轉染)TGF-β1基因的骨髓間充質干細胞（TGF-β1+/-BMMSCs）與CD4+T細胞共培養(yǎng)。用PCR、流式細胞術和蛋白質印跡法等評估Treg細胞標記物（Foxp3、CD25和CD39）、促炎因子IFN-γ和TNF-

5、α的表達水平，評價骨髓間充質干細胞凋亡以及組織工程軟骨吸收情況。
　　結果:TGF-β1+/-BMMSCs+CD4+T細胞的共培養(yǎng)體系中均有IFN-γ和TNF-α基因和蛋白表達。TGF-β1+BMMSCs+CD4+T細胞的共培養(yǎng)體系中Foxp3基因高表達以及17.58±0.45％細胞為CD25+CD39+細胞，且骨髓間充質干細胞凋亡率較TGF-β1-BMMSCs+CD4+T細胞共培養(yǎng)體系中少(p＜0.01)，Ⅱ型膠原的表達量較單純

6、TGF-β1+BMMSCs培養(yǎng)組少(p＜0.05)，且染色較淺。
　　結論:CD4+T細胞可以通過分泌內源性的IFN-γ和TNF-α，導致骨髓間充質干細胞凋亡和組織工程軟骨吸收。同時，TGF-β1能夠誘導CD4+T細胞分化為iTreg細胞，抑制骨髓間充質干細胞凋亡和組織工程軟骨吸收。
　　第三部分 TGF-β1通過調節(jié)局部免疫反應促進Bio-Oss成骨的應用
　　目的:探討抑制Bio-Oss周圍炎癥，促進Bio-Oss

7、在體內成骨的方法，以期為提高臨床牙種植的成功率提供參考依據。
　　方法:首先將骨髓間充質干細胞培養(yǎng)于帶有Bio-Oss的培養(yǎng)液中，通過檢測細胞與材料的分布關系以及材料對細胞增殖分化的影響了解Bio-Oss與細胞的生物相容性;其次建立兔牙槽骨缺損模型并分組修復，通過改變Bio-Oss在體的微環(huán)境，觀察Bio-Oss在體內的成骨效果。
　　結果:共培養(yǎng)組細胞沿胞體長軸呈有序排列，較均勻地貼附于材料表面，與單純細胞組相比未見明顯差

8、異，Bio-Oss對TGF-β1+BMMSCs的增殖及堿性磷酸酶(ALP)活性未見明顯影響。牙槽骨缺損修復術后30、60、90天時，Bio-Oss逐漸由散在顆粒狀與周圍骨組織融合、成骨，但是在促炎因子IFN-γ和TNF-α參與時，Bio-Oss成骨明顯滯后。TGF-β1+BMMSCs參與修復組較單純Bio-Oss修復組成骨作用不顯著。
　　結論:TGF-β1+BMMSCs與Bio-Oss有良好的生物相容性。TGF-β1+BMMSC