百脈根LjPP2C蛋白磷酸酶負調(diào)控MPK6信號轉(zhuǎn)導途徑.pdf

1、根瘤菌和豆科植物之間形成的根瘤共生固氮系統(tǒng)是自然界中植物獲取氮素最環(huán)保、經(jīng)濟的方式，對農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展有重要意義。根瘤共生固氮系統(tǒng)的建立需要一系列的信號途徑。共生信號途徑中的受體激酶SymRK和有絲分裂原激活蛋白激酶激酶SIP2特異性的相互作用。SIP2屬于MAPK信號途徑中的MAPKK家族，調(diào)節(jié)早期侵入線和根瘤原基的形成，是一個重要的早期共生信號調(diào)節(jié)子。本研究是以SIP2的靶蛋白MPK6為研究對象，通過篩選百脈根的AD-cDNA文庫，

2、分離鑒定出與MPK6相互作用的蛋白，主要研究結(jié)果如下:
　　1.從百脈根cDNA中擴增出MPK6全長基因，利用酵母菌株Y187中的報告基因LacZ，檢測MPK6的轉(zhuǎn)錄激活作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)MPK6在酵母系統(tǒng)里有自激活活性，不能作為誘餌蛋白。通過分析MPK6的蛋白序列，構(gòu)建7個缺失突變載體，并分別檢測他們的轉(zhuǎn)錄激活活性和β-半乳糖甘酶活性。結(jié)果表明MPK6的轉(zhuǎn)錄激活位點位于362-386個氨基酸之間。
　　2.以含有MPK6完整激

3、酶結(jié)構(gòu)域且沒有轉(zhuǎn)錄激活作用的MPK61-351為誘餌篩選百脈根AD-cDNA酵母雙雜交文庫，分離鑒定出一個編碼2C類蛋白磷酸酶的基因，命名為LjPP2C。生物信息學分析顯示LjPP2C屬于PP2C大家族，通過蛋白序列和進化樹分析發(fā)現(xiàn)LjPP2C屬于B類亞家族。
　　3.通過酵母雙雜交、體外蛋白Pull-down以及雙分子熒光互補(BiFC)實驗證明MPK6全長和LjPP2C有相互作用。
　　4.在體外，LjPP2C能夠使磷酸