水稻蛋白磷酸酶2C基因OsBIPP2C1和OsBIPP2C2的克隆鑒定與功能分析.pdf_第1頁(yè)
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1、我們實(shí)驗(yàn)室在前期研究中,以苯并噻二唑(BTH)誘導(dǎo)水稻抗病性,用抑制性差減雜交法分離鑒定了200多個(gè)差異表達(dá)的cDNA.基因數(shù)據(jù)庫(kù)同源性搜索分析表明,其中差別表達(dá)克隆HIBI-n9和BIHI-w2與已知植物蛋白磷酸酶2C(PP2C)基因具有較高的同源性,推測(cè)這兩個(gè)克隆很可能編碼水稻PP2C基因的部分序列.為明確這兩個(gè)可能的水稻磷酸酶基因的生物學(xué)功能以及在水稻抗病性中的作用,該研究通過(guò)5'RACE和3'RACE,結(jié)合電子克隆的方法,分離到

2、這兩個(gè)水稻磷酸酶基因的全長(zhǎng)cDNA序列,分別命名為OsBIPP2C1和OsBIPP2C2.采用電子克隆的方法,首先在EST數(shù)據(jù)庫(kù)搜索與BIHI-w2相匹配的水稻EST,并拼接成一條長(zhǎng)的序列.用0.3 mmol/L BTH懸浮液噴霧處理水稻后6 h后OsBIPP2C1即受到快速激發(fā),相對(duì)較高的水平維持至24 h,至72 h才逐漸降低到處理前的水平.將OsBIPP2C1基因連接到轉(zhuǎn)基因載體CHF3的CaMV-35S啟動(dòng)子下游,轉(zhuǎn)化煙草,得到

3、13株轉(zhuǎn)基因株系.PCR擴(kuò)增檢測(cè)OsBIPP2C1基因都整合到煙草基因組中,Northem雜交能檢測(cè)到大部分株系OsBIPP2C1的表達(dá),并組成型表達(dá)煙草PR1基因.轉(zhuǎn)OsBIPP2C1基因T1代增強(qiáng)了煙草對(duì)TMV和煙草黑脛病(Phytophthoraparasitica var.nicotianae)的抗性.用類(lèi)似的方法克隆到另外一個(gè)PP2C蛋白基因OsBIPP2C2,即水稻受BTH誘導(dǎo)的蛋白磷酸酶2C 2(Oryza sativa

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