H19對(duì)孤雌胚胎干細(xì)胞多能性的作用研究.pdf

1、胚胎干細(xì)胞具有多能性而且具有無(wú)限增殖能力和分化潛能。人的胚胎干細(xì)胞對(duì)于治療退化性病變有很大幫助。但是人的胚胎干細(xì)胞研究充滿(mǎn)了倫理道德方面的問(wèn)題。孤雌胚胎干細(xì)胞是一種從激活的卵子中分離出來(lái)的多能性干細(xì)胞，沒(méi)有破壞自然存在的胚胎，因而避免了很多倫理道德上的問(wèn)題。孤雌胚胎以及孤雌胚胎干細(xì)胞沒(méi)有發(fā)育上的全能性是因?yàn)樗鼈兊幕蛴≯E不正常。H19是一個(gè)在胚胎發(fā)育過(guò)程中以及干細(xì)胞分化過(guò)程中高表達(dá)的印跡基因。H19的表達(dá)受到處于其基因上游的印跡調(diào)控區(qū)的

2、控制。H19基因的功能目前還不是很清楚。H19基因敲除的小鼠是存活并可育的。而且如果在孤雌胚胎中敲除了H19，孤雌發(fā)育的時(shí)間能夠進(jìn)行的更長(zhǎng)。更重要的是，如果結(jié)合了核移植技術(shù)以及H19基因敲除，就能得到?jīng)]有精子參與其發(fā)育過(guò)程的小鼠，而且這種小鼠還能夠正常繁殖后代。因此H19有可能在孤雌胚胎以及孤雌胚胎干細(xì)胞中行使著一定功能。
　　 我們首先比較了孤雌胚胎干細(xì)胞與正常受精胚胎干細(xì)胞中H19的表達(dá)情況，H19在孤雌胚胎干細(xì)胞中的表達(dá)要

3、高一些。接下來(lái)我們運(yùn)用RNA干擾技術(shù)在孤雌胚胎干細(xì)胞中對(duì)H19表達(dá)進(jìn)行干擾。在我們的實(shí)驗(yàn)中，降低H19表達(dá)并不影響孤雌胚胎干細(xì)胞的多能性以及自我更新的能力。我們又在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中對(duì)孤雌胚胎干細(xì)胞進(jìn)行了分化。在體外分化實(shí)驗(yàn)中，降低H19表達(dá)后，細(xì)胞中出現(xiàn)心肌樣跳動(dòng)的比例增加，而且跳動(dòng)頻率也加快了，這與檢測(cè)心肌相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)的結(jié)果是相一致的。同時(shí)我們也發(fā)現(xiàn)體外實(shí)驗(yàn)中降低H19表達(dá)能夠使得向表皮分化增加。體內(nèi)的分化實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，H19干擾的