柚皮苷下調(diào)p38MAPK表達(dá)對(duì)糖尿病心肌病大鼠心肌的保護(hù)作用.pdf

1、[目的]：
　　觀察柚皮苷干預(yù)對(duì)糖尿病心肌病(Diabetic Cardiomyopathy，DCM)大鼠心肌p38絲裂原活化蛋白激酶(p38-mitogen-activated protein kinases，p38MAPK)表達(dá)及其對(duì)心肌形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的影響，探討p38MAPK在DCM中的可能作用，柚皮苷是否通過下調(diào)p38MAPK表達(dá)對(duì)DCM大鼠的心肌起保護(hù)作用。
　　[方法]：
　　將60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正

2、常對(duì)照組(NC)10只和模型組(M)50只，NC組一直予普通飼料喂養(yǎng)，M組采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)6周，第6周末一次性小劑量(30mg/kg)鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)腹腔注射行糖尿病(Diabetes MeUitus，DM)模型造模，M組造模成功后繼續(xù)予高糖高脂飼料喂養(yǎng)6周行DCM造模。DM模型造模成功后，M組隨機(jī)分為模型對(duì)照組(MC)、柚皮苷低劑量組(NRG L)、柚皮苷中劑量組(NRG M)、柚皮苷高劑量組(N

3、RGH)、SB203580組(SB)。NRG L組、NRGM組、NRG H組分別予柚皮苷(20、40、80 mg·kg-1·d-1)灌胃，SB組予p38MAPK通路抑制劑SB203580(5mg·kg-1·d-1)腹腔注射，NC組、MC組予生理鹽水灌胃。各組大鼠每2周稱體重，檢測鼠尾術(shù)梢血糖，觀察一般狀態(tài)。干預(yù)6周后各組動(dòng)物經(jīng)心臟取血后處死，取心臟測定心重指數(shù)，用酶聯(lián)免疫法(Enzyme-Linked ImmunoSorbentAssa

4、y，ELISA)檢測血漿腦鈉鈦(Brain natriuretic peptide，BNP)，免疫印跡法(Western Blot，WB)檢測心肌組織總p38絲裂原活化蛋白激酶(total p38mitogen-activated protein kinase，t-p38MAPK)和磷酸化p38絲裂原活蛋白激酶(phosphorylation of p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38MA

5、PK)的表達(dá)情況，光鏡觀察心肌細(xì)胞病理學(xué)及電子顯微鏡觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。
　　[結(jié)果]：
　　1.實(shí)驗(yàn)處理6周后，NRG L組、NRG M組、NRG H組的血糖較MC組下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，SB組血糖無明顯變化。
　　2.NC組心重指數(shù)最小，與MC組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），柚皮苷各組、SB組不同程度使心重指數(shù)降低，與MC組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，其中NRG H組降低效果最好，與NC組

6、比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05)。
　　3.NRG L組、NRG M組、NRG H組、SB組的BNP較MC組明顯下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　4.WB法檢測各組心肌t-p38MAPK表達(dá)水平?jīng)]有明顯改變，NC組具有一定水平的p-p38MAPK表達(dá)，MC組心肌p-p38MAPK表達(dá)水平明顯升高，與NC組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;與MC組比較，NRG L組心肌p-p38MAPK表達(dá)水平有下降，差異具有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;與MC組比較，NRG M組、NRG H組、SB組心肌p-p38MAPK表達(dá)水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與SB組比較，NRG M、NRG H組心肌p-p38MAPK表達(dá)水平相當(dāng)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而NRG L組心肌p-p38MAPK表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.在光鏡下，與NC組比較，MC組心肌細(xì)胞排列極不規(guī)則、紊亂、扭曲，形態(tài)不均勻，細(xì)胞核固縮，甚至裂解消失

8、，可見大部分心肌細(xì)胞有不程度變性、肥大，有的甚至壞死，呈灶性溶解，間質(zhì)內(nèi)可見大量膠原纖維增生及炎性細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管壁明顯增厚。NRG L組部分心肌細(xì)胞改善，部分心肌細(xì)胞肥大、變性，毛細(xì)血管壁輕度增厚，間質(zhì)內(nèi)可見少量膠原纖維增生及散在少量炎性細(xì)胞浸潤。NRG M組、SB組心肌細(xì)胞改善較好，未見炎癥細(xì)胞浸潤。NRG H組改善最好，與正常心肌細(xì)胞大致相同。
　　6.在電鏡下，與NC組比較，MC組心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，明顯腫脹，肌節(jié)結(jié)構(gòu)模糊

9、不清，肌漿網(wǎng)擴(kuò)張，閏盤扭曲模糊斷裂。線粒體腫脹、破裂，間質(zhì)有大量增生的膠原纖維。NRG L組可見部分心肌細(xì)胞稍改善，部分心肌結(jié)構(gòu)紊亂、腫脹，肌節(jié)結(jié)構(gòu)顯示欠清，閏盤稍模糊，曲度稍增大，線粒體腫脹，間質(zhì)可見少量增生的膠原纖維。NRG M組、SB組的心肌結(jié)構(gòu)較清晰，心肌細(xì)胞排列較規(guī)則，細(xì)胞核和閏盤結(jié)構(gòu)大致同NC組，線粒體個(gè)別輕度腫脹。NRG H組心肌結(jié)構(gòu)、線粒體大致同正常。
　　[結(jié)論]：
　　本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)大鼠DCM模型用柚皮苷進(jìn)