重組人EPO細(xì)胞培養(yǎng)及純化工藝優(yōu)化.pdf

1、重組人促紅素(rhEPO)是利用含重組人促紅素cDNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO-dhfr細(xì)胞，并使之表達(dá)的蛋白質(zhì)。本文以原有的EPO培養(yǎng)純化工藝為基礎(chǔ)，通過改變維持期EPO培養(yǎng)工藝和DEAE離子層析工藝，進(jìn)一步提高了該CHO細(xì)胞株的EPO的表達(dá)量和純化產(chǎn)量。
　　通過四組實(shí)驗(yàn)，CK:原培養(yǎng)工藝;組1、組2、組3:分別為在CHO細(xì)胞維持期的2、4、6天分別將細(xì)胞維持液更換為生長液，然后再更換為維持液。通過對四組細(xì)胞培養(yǎng)液葡萄糖、乳酸、氨、體外

2、總活性的檢測，以及對CHO細(xì)胞的顯微鏡觀察，對細(xì)胞培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果顯示，組1、組2、組3細(xì)胞代謝旺盛，生長狀態(tài)、EPO表達(dá)量均優(yōu)于CK組，且組2、組3細(xì)胞生長狀態(tài)、表達(dá)量最優(yōu)。
　　通過調(diào)節(jié)離子交換層析介質(zhì)(DEAE)雜蛋白洗脫液BuffeB的pH值，以及改變DEAE離子層析純化工藝實(shí)驗(yàn)，對蛋白純化技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果顯示，隨著洗脫液pH的增加，蛋白收率逐漸提高，當(dāng)pH為4.3左右時(shí)，蛋白收率、體外總活性達(dá)到最高。