柯里拉京對(duì)單純皰疹病毒性腦炎發(fā)病過程中TLR2通路的干預(yù)作用機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)方面展開論述:
　　第一部分 HSV-1感染小膠質(zhì)細(xì)胞后對(duì)Toll樣受體的影響
　　目的:研究HSV-1感染小膠質(zhì)細(xì)胞后Toll樣受體表達(dá)情況。
　　方法:小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2細(xì)胞接種HSV-1制造細(xì)胞模型，使用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)HSV-1感染組與對(duì)照組TLR2、TLR3、TLR9mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:病毒感染后，TLR2、TLR3、TLR9mRNA均明顯上升，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)

2、學(xué)意義(P<0.01)。
　　結(jié)論:TLR2、TLR3、TLR9參與了BV2小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)HSV-1病毒的識(shí)別。
　　第二部分 HSV-1感染BV2細(xì)胞后對(duì)TLR2及下游通路信號(hào)分子的影響
　　目的:研究HSV-1感染小膠質(zhì)細(xì)胞后對(duì)TLR2信號(hào)通路的影響。
　　方法:小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2接種HSV-1制造細(xì)胞模型，Malp2刺激BV2細(xì)胞作為陽性對(duì)照組，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TLR2蛋白表達(dá)；Western blot檢測(cè)

3、TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO、NF-к Bp65蛋白表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)TLR2、TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO的mRNA表達(dá)；ELISA檢測(cè)IL-6、TNF-α的表達(dá)。
　　結(jié)果:1、BV2細(xì)胞被Malp2刺激后，TLR2及下游信號(hào)通路因子表達(dá)均明顯升高，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。2、HSV-1感染BV2細(xì)胞后，TLR2及下游信號(hào)通路因子表達(dá)明顯

4、升高，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論:TLR2及下游信號(hào)通路因子介導(dǎo)了HSV-1感染BV2細(xì)胞的免疫炎性反應(yīng)。
　　第三部分 柯里拉京對(duì)HSV-1感染后BV2細(xì)胞TLR2通路的調(diào)節(jié)作用
　　實(shí)驗(yàn)1柯里拉京對(duì)HSV-1感染正常BV2細(xì)胞TLR2通路的調(diào)節(jié)作用
　　目的:研究柯里拉京對(duì)HSV-1感染后BV2細(xì)胞TLR2通路的調(diào)節(jié)作用。
　　方法:小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2接種HSV-1制造

5、細(xì)胞模型，Malp2刺激BV2細(xì)胞作為陽性對(duì)照組，細(xì)胞受HSV-1和Malp2干預(yù)后柯里拉京治療24h，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TLR2蛋白表達(dá)；Western blot檢測(cè) TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO、NF-к Bp65蛋白表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè) TLR2、TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO的mRNA表達(dá)；ELISA檢測(cè)IL-6、TNF-α的表達(dá)。
　　結(jié)果:1、柯里拉京治療受M

6、alp2刺激的BV2細(xì)胞后，TLR2及下游信號(hào)通路分子表達(dá)均下降，與生理鹽水治療組比較（P<0.05）。2、柯里拉京治療受HSV-1感染的BV2細(xì)胞后，TLR2及下游信號(hào)通路分子表達(dá)均下降，與生理鹽水治療組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論:柯里拉京可以抑制HSV-1感染BV2細(xì)胞后激活的TLR2信號(hào)通路。
　　實(shí)驗(yàn)2柯里拉京抑制HSV-1感染后BV2細(xì)胞TLR2通路機(jī)制研究
　　目的:研究柯里拉京抑制H

7、SV-1感染后BV2細(xì)胞TLR2通路的機(jī)制。
　　方法:通過慢病毒載體使BV2細(xì)胞TLR2過表達(dá)，HSV-1感染BV2細(xì)胞后柯里拉京治療24h；通過小分子RNA使BV2細(xì)胞TLR2表達(dá)沉默，HSV-1感染BV2細(xì)胞后柯里拉京治療24h結(jié)果，采用Western blot、Real-time PCR和ELISA檢測(cè)TLR2下游信號(hào)通路分子表達(dá)情況。
　　結(jié)果:1、TLR2過表達(dá)時(shí)，柯里拉京治療受HSV-1感染的BV2細(xì)胞后，與生

8、理鹽水治療組比較， TLR2下游信號(hào)通路分子表達(dá)均下降（P<0.05）。2、TLR2表達(dá)沉默時(shí)，柯里拉京治療受HSV-1感染的BV2細(xì)胞后，與生理鹽水治療組比較：TIRAP變化不明顯（P>0.05）；MyD88、TRAF6表達(dá)上升（P<0.05）；P38、NEMO、NF-к Bp65、IL-6、TNF-α表達(dá)下降（P<0.05）。
　　結(jié)論:柯里拉京對(duì)TIRAP、MyD88、TRAF6的抑制作用需要TLR2的參與，同時(shí)柯里拉京可能

9、通過其他的Toll樣受體或者直接對(duì)P38、NEMO、NF-к Bp65、IL-6、TNF-α產(chǎn)生抑制作用。
　　第四部分 柯里拉京對(duì)單純皰疹病毒性腦炎小鼠TLR2通路的影響
　　目的:研究柯里拉京通過抑制TLR2通路治療單純皰疹病毒性腦炎的可行性。
　　方法:Balb/c小鼠顱內(nèi)注射HSV-1制造小鼠單純皰疹病毒性腦炎模型，隨機(jī)分成：正常組、柯里拉京組、Malp2+鹽水治療組、Malp2+柯里拉京治療組、HSV-1+鹽

10、水治療感染組、HSV-1+柯里拉京治療組。采用HE染色觀察腦組織形態(tài)學(xué)；免疫組化檢測(cè)TLR2表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)TLR2、TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO的mRNA表達(dá)；Western blot檢測(cè)TIRAP、MyD88、TRAF6、P38、NEMO、NF-к Bp65蛋白表達(dá)；ELISA檢測(cè)IL-6、TNF-α的表達(dá)。
　　結(jié)果:1、柯里拉京干預(yù)組小鼠腦組織病理改變減輕2、 Malp2+鹽水治療