TLR2信號(hào)途徑介導(dǎo)特應(yīng)性皮炎MoDC抗單純皰疹病毒1型感染的免疫機(jī)制.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)鑒定外周血單核細(xì)胞來源樹突狀細(xì)胞(MoDC)并探討特應(yīng)性皮炎(AD)患者M(jìn)oDC上Toll樣受體2、4(TLR2、TLR4)信號(hào)途徑介導(dǎo)AD MoDC抗單純皰疹病毒1型(HSV-1)感染的免疫機(jī)制。
　　方法：取健康人少量新鮮外周血經(jīng)改良密度梯度離心法分離獲得單核細(xì)胞，加入rhGM-CSF、rhIL-4誘導(dǎo)MoDC生長(zhǎng)，并用TNF-α刺激成熟，倒置顯微鏡及掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；分別于培養(yǎng)第4天和第7天用流式進(jìn)行表型鑒

2、定、CCK-8法檢測(cè)同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)鑒定抗原遞呈能力。取 AD組及健康對(duì)照組外周血培養(yǎng) MoDC，用紫外滅活的 HSV-1感染 MoDC，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)感染前后細(xì)胞表面TLR2、TLR4、MHC-Ⅱ、CD83表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)感染后細(xì)胞TLR2、TLR4、MyD88、TRIF mRNA表達(dá)；ELISA法檢測(cè)感染后細(xì)胞上清IL-12、IFN-α、IFN-γ水平。
　　結(jié)果：MoDC呈類圓形，聚集成團(tuán)，懸浮生長(zhǎng)，掃

3、描電鏡觀察其表面有典型毛刺狀突起；流式檢測(cè) MoDC高表達(dá) CD11c、CD1a，經(jīng)TNF-α刺激后的MoDC表面MHC-Ⅱ、CD80、CD83、CD86表達(dá)均較培養(yǎng)4天的MoDC明顯升高(P＜0.05)；經(jīng)TNF-α刺激后的MoDC刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖能力較培養(yǎng)4天的MoDC明顯升高(P＜0.05)。AD和健康對(duì)照MoDC感染HSV-1前，TLR2、TLR4、MHC-Ⅱ、CD83表達(dá)均無明顯差異(P＞0.05)；HSV-1感染后，

4、健康對(duì)照組 TLR2表達(dá)較感染前無差異(P＞0.05)，AD組TLR2表達(dá)則較感染前明顯升高(P＜0.05)；HSV-1感染后，AD組TLR2、MHC-Ⅱ、CD83表達(dá)均高于健康對(duì)照組(P＜0.05)，兩組TLR4表達(dá)在感染前后均無明顯差異(P＞0.05)。AD組MoDC感染 HSV-1后TLR2、MyD88、TRIF mRNA表達(dá)均高于健康對(duì)照組(P＜0.05)，TLR4則無明顯差異(P＞0.05)。AD組細(xì)胞上清IL-12水平高于健