PSD-007介導(dǎo)的光動(dòng)力療法治療骨肉瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文PSD-007介導(dǎo)的光動(dòng)力療法治療骨肉瘤的實(shí)驗(yàn)研究姓名：胡碩申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)（骨外科）指導(dǎo)教師：蔡鄭東20100501g - 軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文對(duì)三塊板都進(jìn)行6 J ／c m 2 的光照射，照光完畢后更新培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)1 5 m i n 、6 0 m i n 、9 0 m i n 后用M T T 法測(cè)定各孔O D 值，檢測(cè)光動(dòng)力治療早期細(xì)胞的變化。所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3 次。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，我們對(duì)4 周

2、齡雌性C 3 H 小鼠用于皮下種植L M 一8 細(xì)胞。我們將L M ．8 單細(xì)胞懸液注射到小鼠腰骶部皮下( 1 0 5 個(gè)／只) 。用游標(biāo)卡尺測(cè)定腫瘤的生長(zhǎng)。為了評(píng)估P S D ．0 0 7 在體內(nèi)腫瘤的光動(dòng)力療效，當(dāng)小鼠移植瘤直徑為6 ．8 毫米開始行光動(dòng)力治療。我們對(duì)C 3 H 小鼠荷骨肉瘤L M ．8 模型靜脈注射P S D ．0 0 7 ( 5 、1 0 m g ／k g ) ，注射6 小時(shí)后，用6 3 0 n m 激光照射(

3、2 4 0 J ／c m 2 ) ，并選取H p D 作為光動(dòng)力療效對(duì)照。( 每組7 只小鼠) 。光動(dòng)力治療后，光照后避光飼養(yǎng)7 天，以避免皮膚刺激。在激光照射后0 、1 、3 、5 、7 天，測(cè)定腫瘤長(zhǎng)度和寬度，然后用公式：【最長(zhǎng)徑( I l l I l l ) 】+ 【最短徑( m m ) 】／2 代表腫瘤的體積。光動(dòng)力治療后7 天，吸入乙醚使小鼠安樂死，測(cè)量其大小并取材稱取瘤重，并與未治療的對(duì)照組進(jìn)行比較。同時(shí)將移植腫瘤行組織學(xué)檢

4、測(cè)，將切除的腫瘤標(biāo)本，固定包埋后切取4 l a m 切片行蘇木和伊紅染色檢驗(yàn)。此外，我們也研究了光動(dòng)力作為減少腫瘤切除范圍( 即不包括周圍的正常組織的邊緣切除) 及減少腫瘤局部復(fù)發(fā)的輔助治療效果。當(dāng)小鼠腫瘤直徑達(dá)1 0 ．1 2 毫米時(shí)，靜脈注射P S D ．0 0 7 后，邊緣切除腫瘤。我們將荷瘤小鼠模型分成三組( 1 ) 邊緣切除無光動(dòng)力治療( 對(duì)照組) ，僅切除腫瘤而周圍的正常組織保留( 2 ) P S D 一0 0 7 5 m

5、g ／k g ，靜脈注射6 小時(shí)后行腫瘤邊緣切除，劑量2 4 0 J ／c m 2 激光照射( 3 ) P S D ．0 0 7 5 m g ／k g ，靜脈注射6 小時(shí)后行腫瘤邊緣切除，劑量3 6 0 J ／c m 2 激光照射( 每組n = 1 0 ) 。小鼠腫瘤邊緣切除后觀察4 周。我們使用F i s h e r ’S 精確概率檢驗(yàn)法比較單獨(dú)邊緣切除治療組與手術(shù)聯(lián)合光動(dòng)力治療組的腫瘤復(fù)發(fā)率。p < 0 ．0 5 可看作具有顯

6、著差異。結(jié)果：體外實(shí)驗(yàn)表明P S D 一0 0 7 光動(dòng)力療法對(duì)體外培養(yǎng)的M G ．6 3 細(xì)胞、L M ．8 細(xì)胞有明顯的殺傷作用。體外的光動(dòng)力效應(yīng)取決于光敏劑P S D ．0 0 7 治療濃度和激光的照射劑量。單獨(dú)用激光照射以及單獨(dú)注射P S D ．0 0 7 無激光照射均無抗腫瘤作用。相同P S D ．0 0 7 濃度下，激光照射的劑量越高，其抗腫瘤作用越強(qiáng)。通過直接殺傷及誘導(dǎo)凋亡兩種模式最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。小鼠荷瘤L M 一8 模

7、型的體內(nèi)試驗(yàn)顯示，P S D ．0 0 7介導(dǎo)的光動(dòng)力療法可以抑制腫瘤的生長(zhǎng)。單獨(dú)注射P S D ．0 0 7 無激光照射或單純照光均沒有抑制腫瘤的生長(zhǎng)。對(duì)荷瘤小鼠行腫瘤邊緣切除聯(lián)合局部光動(dòng)力療法可以降低腫瘤的局部復(fù)發(fā)率。l O 只沒有聯(lián)合P D T 的小鼠，9 個(gè)在邊緣切除4 周后在病灶切緣出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)。在1 0 只手術(shù)聯(lián)合P D T 治療的低劑量激光組( 2 4 0 J ／c m 2 ) d x 鼠中，4 個(gè)小鼠出現(xiàn)腫瘤局部復(fù)發(fā)。在