STK39、OXSR1、SLC12A3與中國(guó)東北地區(qū)漢族人群高血壓相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：原發(fā)性高血壓是一類復(fù)雜的疾病,約占世界成人數(shù)量的25-30％。高血壓促發(fā)了卒中、心肌梗死、充血性心力衰竭和終末期腎病的發(fā)病率和死亡率的提高,因此,研究其發(fā)病機(jī)制顯得尤為重要。在高血壓的發(fā)病機(jī)制中,遺傳和環(huán)境因素扮演了非常重要的作用。據(jù)估計(jì),人類血壓變異度30％-50％由遺傳因素決定。因此,高血壓遺傳易感基因和遺傳標(biāo)記的鑒別對(duì)高血壓的發(fā)病機(jī)制和治療有很好的理解和指導(dǎo)作用。
　　 在高血壓的發(fā)病機(jī)制中,腎臟離子轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)備受人們

2、的關(guān)注。最近,人們得到了令人振奮的結(jié)果,Ste20蛋白相關(guān)的富含脯氨酸丙氨酸激酶(SPAK,基因符號(hào):STK39)和氧化應(yīng)激反應(yīng)激酶1(OSR1,基因符號(hào):OXSR1)相互作用,共同磷酸化鈉-氯協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)體(NCC,基因符號(hào):SLC12A3),調(diào)節(jié)腎臟的水鹽平衡,進(jìn)而參與血壓的調(diào)節(jié)。然而,關(guān)于該信號(hào)通路與人類高血壓的遺傳相關(guān)性研究目前還沒(méi)有充分的報(bào)道。SPAK蛋白基因-STK39,最近在阿米士人群中通過(guò)全基因組關(guān)聯(lián)分析的方法鑒別出與原發(fā)性

3、高血壓相關(guān),該發(fā)現(xiàn)揭開(kāi)了STK39參與高血壓發(fā)病機(jī)制的序幕。但考慮到遺傳因素的種族異質(zhì)性,很有必要研究STK39及其下游通路的基因在中國(guó)漢族高血壓人群中的作用。
　　 高血壓是一種多基因遺傳性疾病,受多種危險(xiǎn)因素的影響,如年齡、體重指數(shù)(BMI)、糖尿病及吸煙等。因此,研究基因-基因及基因-危險(xiǎn)因素間的相互作用對(duì)理解遺傳因素對(duì)高血壓發(fā)病的貢獻(xiàn)是至關(guān)重要的。在本研究中,我們探討了STK39,OXSR1和SLC12A3是否參與了中國(guó)

4、東北地區(qū)(沈陽(yáng)和哈爾濱)漢族高血壓人群的發(fā)病,以及基因-基因、基因-危險(xiǎn)因素是否相互作用共同促進(jìn)高血壓的發(fā)生和發(fā)展。
　　 方法：我們于2005年-2008年募集來(lái)自沈陽(yáng)和哈爾濱的漢族人群1210人(高血壓601人,正常血壓609人)和4598人(高血壓2145人,正常血壓2453人),分別作為人群1和人群2。采用標(biāo)準(zhǔn)的水銀血壓計(jì)測(cè)量受試者的右臂血壓。調(diào)查問(wèn)卷的方式獲取入選者的其它相關(guān)信息,如身高、體重、高血壓病家族史、吸煙和飲

5、酒等。高血壓的入選標(biāo)準(zhǔn)為收縮壓≥140 mmHg,和/或舒張壓≥90 mmHg,和/或目前應(yīng)用抗高血壓藥物治療。正常對(duì)照組(正常血壓)人群均沒(méi)有高血壓家族史,并且在過(guò)去的5年內(nèi)進(jìn)行規(guī)律的物理鍛煉,且血壓＜140/90 mmHg,從未應(yīng)用過(guò)抗高血壓藥物。糖尿病的入選標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)(ADA)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。
　　 我們根據(jù)如下標(biāo)準(zhǔn)選擇STK39,OXSR1和SLC12A3共11個(gè)標(biāo)簽SNPs:1)所有的標(biāo)簽SNPs均盡可能涵蓋較

6、多的SNPs位點(diǎn);2)具有功能性;3)最小等位基因頻率(MAF)＞10％。在入選的11個(gè)標(biāo)簽SNPs中,STK39包括rs3754777,rs6749447,rs6433027,rs1448827,rs7595310;OXSR1包括rs4955408,rsl2629406;SLC12A3包括rs5804,rs6499857,rs711747,rs8063291。
　　 我們運(yùn)用蛋白酶K的方法提取血液基因組DNA。在人群1(沈陽(yáng))

7、中對(duì)入選的11個(gè)標(biāo)簽SNPs運(yùn)用等位基因特異性PCR(AS-PCR)的方法進(jìn)行分型,分型差的樣品用基因測(cè)序的方法來(lái)鑒別,比較這11個(gè)標(biāo)簽SNPs在高血壓組和正常對(duì)照組間最小等位基因頻率(MAF)的差異以及與性別的相關(guān)性。這些有差異的SNPs,即和高血壓相關(guān)SNPs位點(diǎn)進(jìn)一步在另一個(gè)人群-哈爾濱人群中驗(yàn)證。進(jìn)一步運(yùn)用Logistic回歸分析SNPs與高血壓危險(xiǎn)因素的相關(guān)性:年齡、體重指數(shù)、糖尿病、吸煙、飲酒等及基因-基因間的相互作用。

8、r>　　 結(jié)果：
　　 一、沈陽(yáng)人群的等位基因相關(guān)性分析在入選的11個(gè)標(biāo)簽SNPs中,所有的SNPs均符合哈迪-溫伯格平衡。STK39的兩個(gè)SNPs,rs6433027和rs3754777,與人群1(沈陽(yáng))的高血壓病相關(guān),尤其與男性高血壓相關(guān)(P=0.008-0.024),與女性不相關(guān)。其它的SNPs與高血壓及性別均不相關(guān)。
　　 二、哈爾濱人群的等位基因相關(guān)性分析兩個(gè)相關(guān)SNPs,rs6433027和rs375477

9、7,在人群2(哈爾濱)中的相關(guān)性得到驗(yàn)證,仍顯示與男性高血壓相關(guān)(P=0.0001-0.004),與女性不相關(guān)。在男性的相對(duì)危險(xiǎn)性(95％置信區(qū)間,P值)分別為1.269(1.131-1.424;P=0.0001),1.231(1.078-1.405;P=0.004)。在高血壓的危險(xiǎn)因素校正后,如年齡、體重指數(shù)、糖尿病、吸煙、飲酒,仍顯示與男性高血壓相關(guān)。
　　 三、STK39與高血壓相關(guān)的遺傳模式為了研究SNPs rs6433

10、027和rs3754777與高血壓相關(guān)的遺傳模式,我們對(duì)人群2(哈爾濱)中的男性在顯性、隱性、共顯性三種遺傳模式下進(jìn)行了基因型的關(guān)聯(lián)分析,以及在危險(xiǎn)因素的校正下,如:年齡,BMI,糖尿病,吸煙,飲酒。我們發(fā)現(xiàn)SNP rs6433027在隱性、共顯性遺傳模式下與男性高血壓相關(guān)(校正P=3.18×10-6-5.30×10-5)。SNP rs3754777在顯性、共顯性遺傳模式下與男性高血壓相關(guān)(校正P=0.007-0.002)。
　　

11、 四、SNPs與危險(xiǎn)因素的相互作用在人群2(哈爾濱)男性中,SNPs rs6433027和rs3754777基因型分布對(duì)年齡、BMI的影響通過(guò)方差分析來(lái)評(píng)估,繼以Post-hoe test LSD(Fisher's least significantdifference)評(píng)估,糖尿病三種基因型(AA,Aa,aa)的不同流行率通過(guò)皮爾森卡方檢驗(yàn)來(lái)分析。我們發(fā)現(xiàn),年齡、BMI、糖尿病的流行率在三種基因型中未見(jiàn)明顯差異,SNPs rs643

12、3027和rs3754777與年齡、BMI、糖尿病均不相關(guān)。
　　 五、SNP-SNP的相互作用SNPs rs6433027和rs3754777的等位基因分別是T/c和G/a(最大等位基因/最小等位基因)。為了評(píng)估這兩個(gè)SNPs間是否有相互作用,我們對(duì)比了人群2男性中攜帶T-T/G-G,T-T/a-a,c-c/G,c-c/a-a這四種基因型中的高血壓病流行率。在T-T/G-G和T-T/a-a組中,我們并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)高血壓病流行率的不

13、同,但是,與攜帶基因型T-T/G-G的群體相比,攜帶基因型c-c/G-G的群體高血壓流行率迅速增加。攜帶基因型c-c/a-a群體在四組中展示了最高的高血壓流行率。
　　 結(jié)論：
　　 STK39與中國(guó)漢族人群男性高血壓相關(guān),與年齡、體重指數(shù)、糖尿病均不相關(guān),是男性高血壓發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。STK39基因內(nèi)SNPs rs6433027和rs3754777相互作用,SNPrs6433027的等位基因T對(duì)SNP rs37547