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文檔簡介
1、[目的]研究實驗性光損傷小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(retinal pigment epithelium,RPE)中金屬蛋白酶組織抑制物-1(tissue inhibitor of metalloprotelnase-1,TIMP-1)表達的變化,以及促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin,EPO)對其的影響,探討EPO對視網(wǎng)膜光損傷發(fā)揮保護作用的機制。 [方法]52只健康成年近交系BALB/C小鼠,隨機分為單純光照組(24只
2、)、EP0處理組(24只)和正常對照組(4只)3組。其中前兩組按光照后處死時間的不同又各自分出6h、12h、36h、72h、96h和7d6個亞組,置于6000LUX光照箱中照射4h,EPO處理組小鼠光照前2小時腹腔注射重組人促紅細(xì)胞生成素(recombination human erythropoietin,rHuEPO),劑量為5000 U/kg。采用蘇木素-伊紅(HE)染色觀察RPE細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、免疫組織化學(xué)法檢測其TIMP-1、
3、細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK-1)蛋白的表達。 [結(jié)果] (1)形態(tài)學(xué)發(fā)現(xiàn):正常小鼠視網(wǎng)膜RPE細(xì)胞呈單線狀排列,細(xì)胞形態(tài)規(guī)整。單純光照后12小時,RPE細(xì)胞排列疏松;光照后36小時, RPE細(xì)胞明顯腫脹、邊界不清、形態(tài)不規(guī)則;光照后7天, RPE細(xì)胞出現(xiàn)丟失、雙層現(xiàn)象。EPO處理組小鼠視網(wǎng)膜組織學(xué)改變較晚發(fā)生且不明顯,并且未見明顯細(xì)胞丟失、雙層現(xiàn)象。 (2)TIMP-1免疫組化發(fā)現(xiàn):正常小鼠視網(wǎng)膜RPE細(xì)胞中TI
4、MP-1弱陽性表達。單純光照組光照后各時間段TIMP-1陽性表達無明顯變化。EPO處理組IIMP-1較單純光照組表達明顯增強,光照后12小時,RPE層可見明顯TIMP-1陽性表達,隨著光照后時間的推移,陽性RPE細(xì)胞棕黃色染色強度遞增,光照后96小時TIMP-1表達強度達到高峰。 (3)ERK-1免疫組化發(fā)現(xiàn):正常小鼠視網(wǎng)膜組織無ERK-1陽性表達。單純光損傷后RPE細(xì)胞ERK-1表達較正常對照無明顯改變。EPO處理后,從光照后
5、6h起,各亞組均可見到陽性表達細(xì)胞,且隨光照后時間的推移陽性表達呈現(xiàn)逐漸遞增的趨勢,光照后72h表達強度達到高峰,光照后7天ERK-1陽性表達強度降低。 [結(jié)論]光損傷可以造成小鼠視網(wǎng)膜RPE細(xì)胞漸進性的破壞,同時RPE細(xì)胞TIMP-1的表達在損傷過程中沒有明顯的變化。外源性的EPO可以促進光損傷后視網(wǎng)膜RPE細(xì)胞TIMP-1的表達的增加,有利于MMPs/TIMP平衡的恢復(fù),進一步證實EPO對視網(wǎng)膜光損傷的保護作用。EPO對RP
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