BMSCs聯(lián)合促紅細(xì)胞生成素治療大鼠脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:構(gòu)建穩(wěn)定的SD大鼠脊髓損傷模型，探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)聯(lián)合促紅細(xì)胞生成素(EPO)對其修復(fù)的作用機(jī)制。
　　方法:1.采用全骨髓培養(yǎng)法獲取BMSCs，利用流式細(xì)胞儀檢測P2、P3代細(xì)胞表型以鑒定細(xì)胞。2.采用Hatteras Instruments PCI3000精密打擊器，設(shè)置打擊參數(shù)，建立T10節(jié)段的SD大鼠脊髓損傷模型。3.120只SD雄性大鼠完全隨機(jī)分為四組，每組30只，A組為損傷對照組，B組為EPO治療

2、組，C組為BMSCs治療組，D組為BMSCs聯(lián)合EPO治療組。術(shù)后1、3、7、14、28天每組分別取6只大鼠，采用BBB評分評價(jià)雙后肢運(yùn)動功能后進(jìn)行組織學(xué)檢測，觀察細(xì)胞凋亡率和NF-200的表達(dá)量，其中C組和D組還檢測BrdU標(biāo)記的BMSCs在損傷區(qū)的陽性率。采用軟件SPSS19.0對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:1.BMSCs經(jīng)全骨髓法培養(yǎng)3代以內(nèi)均具有典型成纖維樣細(xì)胞形態(tài)而且貼壁生長;細(xì)胞表型(CD29、 CD90、CD3

3、4、CD45)陽性率檢測結(jié)果:P2代分別為91.5％、96.2％、1.3％、8.0％; P3代分別為98.2％、98.1％、0.6％、2.0％。2.細(xì)胞生長曲線結(jié)果表明，以濃度8×104/ml接種，細(xì)胞增殖速度快，獲得的細(xì)胞總數(shù)多。3.BBB運(yùn)動功能評分結(jié)果，術(shù)后7、14、28天，B、C、D組明顯高于A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05);D組明顯高于B、C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。4.細(xì)胞凋亡指數(shù)結(jié)果，術(shù)后1天損傷區(qū)細(xì)胞明

4、顯凋亡，3天達(dá)到高峰，以后逐漸下降，各時間段內(nèi)組間比較均為:A＞B＞C＞D，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。5.NF-200表達(dá)水平術(shù)后迅速下降，3天下降水平達(dá)到高峰，以后表達(dá)逐漸升高，各時間段內(nèi)組間比較均為:A＜B＜C＜D，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。6.BrdU標(biāo)記的BMSCs陽性率在術(shù)后各時間段D組均明顯高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:1.第3代大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可作為脊髓損傷移植的種子細(xì)胞