低氧對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞球上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化促轉(zhuǎn)移影響.pdf

1、肺癌是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。其惡性程度高，轉(zhuǎn)移發(fā)生早，對(duì)放化療敏感性較差，死亡率居高不下，其中轉(zhuǎn)移是肺癌患者死亡的主要原因之一。
　　 近年來(lái)提出的腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells，CSC)學(xué)說(shuō)及其的研究進(jìn)展，為人們認(rèn)識(shí)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)提供了一個(gè)全新的視野。根據(jù)腫瘤干細(xì)胞在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中所起的決定作用，有學(xué)者進(jìn)一步提出了轉(zhuǎn)移腫瘤干細(xì)胞(migrating cancer stem cells，MCSC

2、)的概念。在絕大多數(shù)實(shí)體瘤內(nèi)存在低氧微環(huán)境，已有研究報(bào)道低氧對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移起促進(jìn)作用；然而，目前對(duì)于CSC在低氧環(huán)境下轉(zhuǎn)移能力相關(guān)特征，尚缺乏相關(guān)的研究。
　　 本實(shí)驗(yàn)旨在觀察在低氧微環(huán)境因素刺激下對(duì)具有干細(xì)胞特性的A549細(xì)胞球通過(guò)上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)機(jī)制促進(jìn)肺癌轉(zhuǎn)移的影響。
　　 目的：探討低氧對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞來(lái)源A549細(xì)胞球EMT促進(jìn)肺

3、癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的影響。
　　 方法：采用腫瘤干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基(serum-free medium，SFM)的方法培養(yǎng)A549細(xì)胞，誘導(dǎo)A549細(xì)胞球體形成；隨后將A549細(xì)胞和A549細(xì)胞球體在低氧環(huán)境下培養(yǎng)24h，分別檢測(cè)2種細(xì)胞中EMT標(biāo)志物上皮細(xì)胞鈣粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表達(dá)水平，并與它們?cè)诔Ｑ鯒l件下的表達(dá)情況進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果：(1)免疫熒光：在常氧和低氧條件下，A549

4、細(xì)胞E-cadherin蛋白較A549細(xì)胞球表達(dá)強(qiáng)；常氧A549細(xì)胞球相對(duì)熒光強(qiáng)度為5.20±1.72，低氧A549細(xì)胞球?yàn)?；而Vimentin表達(dá)與E-cadherin結(jié)果相反，常氧A549細(xì)胞球Vimentin相對(duì)熒光強(qiáng)度為7.05±1.52，低氧A549細(xì)胞球?yàn)?9.63±1.25。兩兩比較均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(2)RT-PCR：在常氧和低氧條件下，A549細(xì)胞E-cadherin的mRNA較A549細(xì)胞球表達(dá)

5、強(qiáng)；常氧A549細(xì)胞球mRNA相對(duì)表達(dá)量為175±8.2，低氧A549細(xì)胞球?yàn)?2±6.5；而Vimentin表達(dá)與E-cadherin結(jié)果相反，常氧A549細(xì)胞球Vimemin的mRNA相對(duì)表達(dá)量為244±8.1，低氧A549細(xì)胞球?yàn)?07±5.1。兩兩比較均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(3)Western-blot：在常氧和低氧條件下，A549細(xì)胞E-cadherin蛋白較A549細(xì)胞球表達(dá)強(qiáng)；常氧A549細(xì)胞球蛋白相對(duì)表達(dá)