化毒補(bǔ)虛方對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞Survivin、livin基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過制備臨床驗(yàn)方化毒補(bǔ)虛方大鼠含藥血清，體外培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞，采用現(xiàn)代研究方法，檢測(cè)其抑制率、凋亡率及凋亡抑制相關(guān)基因Survivin、livin的表達(dá)情況，探討化毒補(bǔ)虛方治療肺癌的作用機(jī)制。
　　方法:(1)應(yīng)用倒置顯微鏡觀察不同濃度含藥血清作用于人肺腺癌A549細(xì)胞后對(duì)其形態(tài)學(xué)的影響，同時(shí)應(yīng)用MTT法檢測(cè)不同濃度含藥血清對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞增殖的影響。(2)應(yīng)用Annexin FITC-Ⅴ/PI雙染色流式法檢測(cè)

2、不同濃度含藥血清對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡的影響。(3)應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)化毒補(bǔ)虛方作用于人肺腺癌A549細(xì)胞后Survivin、livin基因的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:(1)分別觀察化毒補(bǔ)虛方12.5％含藥血清組、25％含藥血清組、50％含藥血清組、空白血清組、順鉑組作用于人肺腺癌A549細(xì)胞24h、48h時(shí)，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，各含藥血清組:部分細(xì)胞體積變小，形體皺縮，形態(tài)變成不規(guī)則狀，貼

3、壁不良，少許細(xì)胞脫落聚集且隨著含藥血清濃度的升高，上述異常生長(zhǎng)細(xì)胞增多。空白血清組細(xì)胞生長(zhǎng)良好，順鉑組脫落細(xì)胞最多，出現(xiàn)細(xì)胞凝集團(tuán)塊，多數(shù)細(xì)胞貼壁不良，細(xì)胞體積變小。MTT法檢測(cè)12.5％含藥血清組、25％含藥血清組、50％含藥血清組、空白血清組、順鉑組作用于人肺腺癌A549細(xì)胞24h、48h的抑制率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示:12.5％含藥血清組的抑制率與同一時(shí)間點(diǎn)空白血清組比較，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。25％含藥血清組、5

4、0％含藥血清組的抑制率與同一時(shí)間點(diǎn)空白血清組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，各組抑制率與同一時(shí)間點(diǎn)順鉑組比較，均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，說明化毒補(bǔ)虛方對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞具有增殖抑制作用。其增殖抑制作用與含藥血清濃度-時(shí)間呈正相關(guān)關(guān)系，即隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)和含藥血清濃度的增加，其增殖抑制作用增強(qiáng)。化毒補(bǔ)虛方50％含藥血清組作用于人肺腺癌A549細(xì)胞48h時(shí)，其抑制率最高，為21.650±9.515％。(2)用Annex

5、in FITC-V/PI雙染色流式法分別檢測(cè)化毒補(bǔ)虛方12.5％含藥血清組、25％含藥血清組、50％含藥血清組、空白血清組、順鉑組作用于人肺腺癌A549細(xì)胞24h、48h時(shí)的凋亡率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示:化毒補(bǔ)虛方12.5％含藥血清組、25％含藥血清組、50％含藥血清組與同一時(shí)間點(diǎn)空白血清組比較，有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，說明化毒補(bǔ)虛方對(duì)A549細(xì)胞具有明顯的誘導(dǎo)凋亡作用。其誘導(dǎo)凋亡作用與含藥血清濃度-時(shí)間呈正相關(guān)關(guān)系，即

6、隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)和含藥血清濃度的增加，其誘導(dǎo)凋亡作用明顯增強(qiáng)?；狙a(bǔ)虛方50％含藥血清組作用于人肺腺癌A549細(xì)胞48h時(shí)，其凋亡率最高，為15.90±0.99％。(3)應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)48h時(shí)抑制率與凋亡率最高的50％的含藥血清組與空白血清組A549細(xì)胞SurvivinmRNA、livin mRNA的表達(dá)情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示:化毒補(bǔ)虛方50％含藥血清組作用于人肺腺癌A549細(xì)胞48h時(shí)Survi

7、vin mRNA、livin mRNA表達(dá)均下降，與空白血清組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。說明化毒補(bǔ)虛方具有下調(diào)Survivin、livin基因的表達(dá)。
　　結(jié)論:(1)化毒補(bǔ)虛方對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞有增殖抑制作用，在一定時(shí)間內(nèi)表現(xiàn)出相關(guān)的量-效關(guān)系。(2)化毒補(bǔ)虛方對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞有明顯的誘導(dǎo)凋亡作用，在一定時(shí)間內(nèi)表現(xiàn)出明顯的量-效關(guān)系。(3)化毒補(bǔ)虛方能下調(diào)人肺腺癌A549細(xì)胞中Survivin、livin基因的