RhoC對TGFβ1誘導肺腺癌細胞上皮間質轉化影響的研究.pdf

1、目的：Rho GTP酶是一組鳥核苷酸調節(jié)蛋白，其介導的細胞運動可能在惡性腫瘤的侵襲和轉移中發(fā)揮重要作用。最近研究發(fā)現(xiàn)，RhoC與Rho家族其它成員相比，與其下游效應蛋白ROCK結合力更強，因而認為RhoC對細胞骨架介導的細胞運動調節(jié)能力更強，RhoC的作用可能貫穿于腫瘤轉移的全過程。此外，在腫瘤細胞的上皮間質轉化過程中也發(fā)現(xiàn)有細胞骨架的改變，細胞具有更強的侵襲和遷移能力。由于RhoC效應與EMT的表現(xiàn)存在諸多相似，這種相似性是因為兩者之

2、間具有一定的關聯(lián)，還是彼此獨立，值得進一步研究。因此本文通過TGFβ1誘導肺腺癌A549細胞上皮-間質轉化(epithelial mesenchymaltransition，EMT)，研究RhoC對肺腺癌上皮-間質轉化(EMT)的影響。
　　 方法：利用5ng/ml TGFβ1處理人肺腺癌A549細胞株，用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化，Western-blot檢測上皮表型標志蛋白E-cadherin和間質表型標志蛋白Viment

3、in的表達情況，Transwell體外侵襲試驗檢測細胞侵襲能力的改變以評價細胞是否發(fā)生間質化轉換;同時Western-blot方法檢測RhoC蛋白表達的改變，Pull-down assay分析RhoC活性的變化;在TGFβ1處理細胞前后向細胞內轉入RhoCshRNA，通過觀察細胞的形態(tài)，檢測E-cadherin和Vimentin蛋白的表達和細胞侵襲能力的改變，分析抑制RhoC表達對EMT的影響。
　　 結果：經TGFβ1處理48

4、h后，A549細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，E-cadherin表達明顯減低，并出現(xiàn)Vimentin蛋白表達升高，體外侵襲實驗提示細胞侵襲能力明顯增強，說明細胞發(fā)生了EMT。與此同時RhoC的表達和活性增強，抑制RhoC的表達能明顯降低細胞的體外侵襲能力。用RhoC shRNA處理A549細胞48h，再用5ng/ml TGFβ1處理A549細胞48h后細胞內并沒有出現(xiàn)EMT的特征性表現(xiàn);在5ng/ml TGFβ1處理A549細胞48h后，再用R