卵巢癌相關(guān)分子標志物的初步鑒定及新型靶向抗體的制備.pdf

1、研究背景:
　　卵巢癌是婦科常見惡性腫瘤之一,也是病死率最高的婦科腫瘤。由于發(fā)病隱匿且缺乏有效的早期診斷方法,以致70％的患者確診時已屬晚期,5年存活率僅為20%-30%。目前主要的治療方法是手術(shù)和化療,但約60%~70%的患者在治療中發(fā)生了耐藥和復發(fā)轉(zhuǎn)移。因此,尋找早期診斷手段及有效治療方法,對提高卵巢癌患者的生存率至關(guān)重要。
　　CAI25是目前應(yīng)用最廣泛的檢測卵巢腫瘤的分子標志物,但CA125水平在生理排卵期、子宮內(nèi)膜

2、異位癥、盆腔炎癥及子宮腺肌瘤等婦科良性疾病中也會升高,出現(xiàn)假陽性結(jié)果,可見其用于卵巢癌診斷的敏感度及特異度不佳。隨著腫瘤分子生物學的發(fā)展,與卵巢癌相關(guān)的新的分子標志物不斷問世,也為腫瘤的分子靶向治療提供了依據(jù)。2012年 NCCN指南中,推薦用于復發(fā)卵巢癌的靶向治療藥物只有抗血管生成的貝伐珠單抗。此外,針對表皮生長因子受體家族如 HER1、HER2、HER3以及胰島素樣生長因子1受體(IGF1R)等分子的靶向治療的藥物也研究較多。其中,

3、HER2是乳腺癌治療的經(jīng)典靶點,上市的藥物有曲妥珠單抗( Trastuzumab)和帕妥珠單抗( Pertuzumab)。有研究表明,HER2在卵巢癌組織中高度表達,并且HER2和卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展及不良預(yù)后相關(guān)。
　　目的:
　　鑒定與卵巢癌密切相關(guān)的分子標志物,合理選擇潛在的治療靶點,通過構(gòu)建大容量噬菌體抗體庫,從中篩選人源優(yōu)化抗體并鑒定新抗體的體內(nèi)外功能,初步探討新抗體抑制卵巢癌的作用機制。
　　材料與方法:

4、r>　　1、收集患有婦科良性疾病的女性血清樣本68例,檢測其血清HE4和CA125的水平,進而評價HE4在診斷卵巢癌中的特異性。
　　2、采用生物芯片的技術(shù)手段對HER2、HER3、IGF1R等分子在卵巢癌組織中的特異性表達及其與腫瘤分期的關(guān)系進行初步分析;
　　3、利用Cre-LoxP重組系統(tǒng)構(gòu)建大容量表位定向抗體庫,用于新抗體的篩選并鑒定新抗體的體內(nèi)外功能;
　　4、利用pCMV抗體真核表達質(zhì)粒,構(gòu)建全抗表達載體,

5、對抗體的抗原結(jié)合、親和力、抗原表位及體內(nèi)抑瘤等效應(yīng)進行初步鑒定;
　　5、利用卵巢癌細胞系 SKOV3,在體外鑒定新抗體對其遷移、凋亡、ADCC及信號轉(zhuǎn)導等的影響。
　　結(jié)果:
　　1、患有婦科良性疾病的女性血清中,HE4水平的增加低于CA125,表明HE4在診斷卵巢癌的特異性優(yōu)于CA125。
　　2、HER2、HER3、IGF1R等分子在卵巢癌組織中呈高表達并與腫瘤的分期密切相關(guān),均可作為卵巢癌潛在治療的靶點。