應用SELDI-TOF-MS篩選卵巢癌血清生物標志物.pdf

1、背景與目的： 卵巢癌(上皮性癌)是病死率最高的婦科惡性腫瘤。盡管近年來卵巢癌的手術和化療有了長足進步，但其總體生存率仍無明顯改善。主要原因：一是由于病變早期患者常無自覺癥狀，且卵巢位于盆腔深部，常規(guī)體檢不易發(fā)現(xiàn)異常，導致70％以上的卵巢癌確診時已屆晚期；二是雖然很多患者初治有效，但病變往往在一個相當短的疾病緩解期后復發(fā)或者出現(xiàn)疾病進展。因此若能尋找到卵巢癌的早期診斷方法，對臨床療效進行有效監(jiān)測并進而預警復發(fā)和/或轉移，將大大提

2、高卵巢癌患者的總體生存率。 目前在卵巢癌早期診斷和療效監(jiān)測方面存在諸多困難：卵巢癌診斷主要通過臨床體檢、超聲檢查和血清標志物檢測。癌抗原125(caneer antigen 125．CAl25)是廣泛應用于卵巢癌檢測的生物學指標，晚期卵巢癌陽性率可達80％以上，但I期卵巢癌僅有50％～60％的患者血清CAl25值升高，單用CAl25診斷卵巢癌的陽性率<10％，聯(lián)合超聲也只能將診斷陽性率提高到20％；在療效評價和預測復發(fā)方面，

3、CAl25亦是有效指標，但尚有15％左右的患者CAl25并不隨疾病進展而相應升高。 生物標志物在腫瘤診斷、療效評價及復發(fā)監(jiān)測等方面具有重要地位。基因突變，轉錄和翻譯產物的變化都可能成為疾病的潛在特異性標志物。然而，基因轉錄和翻譯水平的表達與蛋白質豐度并不完全一致，基因測序或基因表達定量方面的研究成果并不能預測蛋白質的表達水平及其功能。因此，鑒定細胞內蛋白質的結構、功能以及相互作用是后基因組時代的一項重要任務，而闡明患者體液中

4、蛋白質組學的變化，找出特異性標志物，將有利于腫瘤早期診治。血清、尿液、腦脊液等可用于測定蛋白質組成，而且這些樣品的采集是無創(chuàng)或微創(chuàng)的，人們迫切要求對這些樣品中表達的蛋白質進行分析，找出疾病相關性蛋白質來用于疾病的診斷和篩選。然而，利用傳統(tǒng)方法對腫瘤相關蛋白進行識別和分析是相當復雜的過程。雙向電泳(two-dimensional electrophoresis，2-DE)、色譜技術等已被證明是蛋白質組學研究的有效方法，但受到技術條件要求

5、高、步驟繁瑣、耗時冗長等因素的限制，不適用于大規(guī)模篩選和臨床標本檢測。 表面增強激光解吸電離飛行時間質譜(surface-enhanced laser desorption/ionization time 0fflight mass spectrometry，SELDI-TOF-MS)是近幾年發(fā)展起來的一種新的蛋白質組學研究方法，融合了質譜和芯片兩大技術的優(yōu)點，具有高通量、高靈敏度等特點，能對樣品中蛋白質進行全景式分析，進而同時

6、發(fā)現(xiàn)多個特異性標志物，為腫瘤早期診斷、療效監(jiān)測等提供了嶄新的技術平臺。本課題擬通過分析卵巢癌與對照組血清中的差異表達蛋白來篩選卵巢癌診斷標志物，通過比較卵巢癌治療前后血清蛋白表達圖譜的變化來尋找治療相關標志物。 結論： 1．應用SELDI-TOF-MS技術獲得卵巢癌血清蛋白質表達圖譜的實驗方法穩(wěn)定可靠，具有良好的重復性。 2．M/z 6195，6311，6366，11 498的4個候選生物標志物可正確區(qū)分

7、卵巢癌與健康人。 3．由4個生物標志物特定組合構成的診斷模型檢測卵巢癌的敏感性和特異性均優(yōu)于CAl25檢測。 4．M/z 4475的蛋白峰可能為化療誘導產生，可作為卵巢癌療效監(jiān)測的新的候選生物標志物。 主要創(chuàng)新點： 1．應用WCX2蛋白芯片篩選出4個有別于國際上其他相關報道的血清生物標志物，該4個生物標志物組成的診斷模型在卵巢癌檢測方面具有良好效果。 2．首次探討血清蛋白質圖譜在卵