用于肝癌潛在血清標(biāo)志物鑒定的抗體芯片技術(shù).pdf

1、肝癌是最常見的惡性腫瘤之一，肝癌的早期診斷是提高患者生存率的關(guān)鍵。目前的肝癌診斷主要是通過(guò)包括甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)的血清學(xué)水平檢測(cè)并結(jié)合肝臟的影像學(xué)檢測(cè)進(jìn)行的超聲造影，但是由于缺乏足夠的診斷敏感性而難以實(shí)現(xiàn)肝癌的早期診斷。因此，發(fā)現(xiàn)新的血清蛋白標(biāo)志物對(duì)于肝癌的臨床診斷具有重要價(jià)值，目前通過(guò)分析肝癌組織和健康組織中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多潛在的蛋白質(zhì)標(biāo)志物，但大部分都沒有經(jīng)過(guò)血清學(xué)的鑒定研究。

2、為此，本文擬通過(guò)抗體芯片技術(shù)來(lái)開展肝癌潛在血清標(biāo)志物的鑒定研究。
　　 目的：建立一種基于抗體芯片的通量化檢測(cè)技術(shù)，應(yīng)用于肝癌潛在血清標(biāo)志物的鑒定研究，為肝癌的早期診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：在醛基修飾的玻片表面制備了針對(duì)14種肝癌潛在血清蛋白標(biāo)志物的抗體微陣列，按照標(biāo)準(zhǔn)的臨床血清樣本采集程序共采集了44例肝癌和46例健康者的血清樣本，采用對(duì)血清樣本直接進(jìn)行生物素標(biāo)記的抗體芯片分析策略，通過(guò)對(duì)肝癌患者與健康者血

3、清樣本中這些潛在蛋白標(biāo)志物的表達(dá)水平進(jìn)行差異分析，來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)這些潛在標(biāo)志物的血清學(xué)鑒定。
　　 結(jié)果：建立起了針對(duì)直接標(biāo)記血清樣本的抗體芯片分析技術(shù)的優(yōu)化條件：如采用5％的脫脂奶粉作為芯片的封閉劑，室溫封閉1小時(shí)；在生物素標(biāo)記試劑與血清蛋白的質(zhì)量比為1∶40，血清樣本的最終稀釋比例為1∶200時(shí)，可獲得理想的芯片檢測(cè)效果?？贵w芯片對(duì)90例血清樣本的初步檢測(cè)結(jié)果表明HSP70、CK19、GPC3、PTMA、AFU、GP73、HBXA

4、g、CA125等8種潛在蛋白標(biāo)志物的表達(dá)水平在肝癌和健康者血清中存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，8種血清蛋白潛在標(biāo)志物指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)肝癌的陽(yáng)性預(yù)測(cè)率可達(dá)到88.6％、特異性達(dá)到97.8％。
　　 結(jié)論：所建立的基于血清樣本生物素直接標(biāo)記的抗體芯片分析策略，是一種有效的可同時(shí)檢測(cè)多種蛋白指標(biāo)在血清中表達(dá)情況的通量化分析技術(shù)，不僅可以完成14種肝癌潛在標(biāo)志物的血清學(xué)鑒定，而且也可以通過(guò)擴(kuò)展研究實(shí)現(xiàn)對(duì)更多肝癌潛在標(biāo)志物的鑒定以及為其他疾病潛在標(biāo)志物的血