兔腹主動脈球囊損傷后IL-8對VSMCs增殖的影響.pdf

1、經(jīng)皮冠狀動脈腔內成形術(percutaneous transluminal coronaryangioplasty，PTCA)是治療冠心病安全、有效的方法，但術后3～6個月再狹窄發(fā)生率達30％～50％，嚴重影響其遠期療效。再狹窄的發(fā)生機制至今尚未完全闡明。目前，大多數(shù)學者認為血管平滑肌細胞向內膜下遷移并過度增殖是其關鍵環(huán)節(jié)之一，因此血管平滑肌細胞增殖的調節(jié)成為研究的焦點。一些研究資料顯示球囊損傷后血管再狹窄與血管彈性回縮、血栓的形成和機

2、化，血管平滑肌細胞(VSMCs)過度增殖及細胞外基質的聚集等有關。其中VSMCs的過度增殖可能是再狹窄形成的主要原因，對血管進行球囊擴張后，血管內皮和中膜平滑肌細胞受到牽拉、損傷，在修復過程中在一系列生長因子的刺激作用下，VSMCs過度增殖、并向內膜方向遷移。因而抑制VSMCs過度增殖以防治再狹窄成為廣大醫(yī)務工作者關注和研究的課題。
　　 白細胞介素-8(Interleukin-8，IL-8)是趨化因子CXC亞家族的一員，主要由

3、單核細胞產(chǎn)生，其主要生理活性是趨化和激活中性粒細胞并分泌大量的黏附分子，使中性粒細胞表面CD11b/CD18受體上調。IL-8可以誘導平滑肌細胞的增殖和遷移，是一個促血管生成因子，在炎癥反應過程中起著重要的作用。IL-8能促使單核細胞在內皮細胞上的滾動轉變成強有力的黏附。研究發(fā)現(xiàn)，升高的IL-8水平與冠狀動脈疾病的發(fā)病有關，并且可以作為心臟事件的預測因子。
　　 目的：本研究通過球囊擴張拉傷兔腹主動脈，建立動脈再狹窄模型，造影檢

4、查腹主動脈管腔狹窄變化情況，采用組織病理觀察血管球囊擴張術后內膜和中層平滑肌的結構改變，利用免疫組化技術觀察IL-8蛋白陽性表達和PCNA陽性表達細胞數(shù)，研究IL-8對血管平滑肌細胞(VSMCs)增殖的影響，為防治PCI術后再狹窄提供可靠的理論依據(jù)。
　　 方法：選擇雄性新西蘭大白兔24只為實驗對象，體重2.50-3.25kg，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供。以上實驗動物隨機分為實驗組(experimentgroup)、治療組(

5、treatmentgroup)和假手術組(shamgroup)，每組各8只動物。實驗組和治療組動物通過穿刺股動脈，送入球囊拉傷腹主動脈。治療組動物通過耳緣靜脈注射IL-8單克隆抗體進行干預。假手術組動物只進行股動脈穿刺和留置鞘管，不進行球囊擴張拉傷。
　　 1.分別于實驗前，實驗后4小時、1天、3天，1周、2周、4周，耳緣靜脈采血4ml，檢測三組動物血清IL-8水平。
　　 2.術后4周時處死動物進行病理組織學檢查，應用

6、光學顯微鏡和計算機病理圖象分析系統(tǒng)分析測定以下指標：內膜中膜厚度、面積，計算血管狹窄程度[（鄰近正常血管管徑-狹窄段最小管徑）/鄰近正常血管管徑]。
　　 3.利用免疫組化染色技術觀察IL-8蛋白表達情況，增殖細胞核抗原PCNA染色分析后，用光學顯微鏡和計算機病理圖象分析系統(tǒng)測定每40倍視野中PCNA陽性細胞比例，計算陽性細胞數(shù)和陽性細胞百分率。
　　 結果：
　　 1.三組實驗動物之間體重、月齡、血脂等一般情況

7、比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 2.術前IL-8水平比較，實驗組、治療組、假手術組三組之間無明顯差異，實驗組動物球囊損傷4小時后IL-8水平即開始升高，術后1d達到峰值，持續(xù)增高4周，且明顯高于治療組和假手術組。治療組和假手術組動物IL-8水平無上述變化規(guī)律。
　　 3.實驗組動物腹主動脈明顯狹窄，組織學檢查內膜面積和中膜面積、血管狹窄程度等指標大于治療組和假手術組（P＜0.01），治療組管腔有所狹窄，假

8、手術組動物管腔無明顯變化，治療組與假手術組無顯著性差異(P＞0.05)。相關分析顯示，IL-8水平與內膜厚度、內膜面積、中膜厚度、中膜面積等呈正相關（相關系數(shù)r分別為0.905，0.897，0.852，0.846，P均＜0.01）。
　　 4.免疫組化顯示，實驗組與治療組和假手術組比較，IL-8蛋白陽性表達明顯升高（P＜0.05），治療組高于假手術組，無明顯差異。PCNA陽性細胞比例比較，實驗組明顯高于治療組與假手術組（P＜0.

9、05），治療組明顯高于假手術組（P＜0.05）。相關分析顯示IL-8陽性表達細胞數(shù)與PCNA陽性細胞數(shù)呈正相關，相關系數(shù)r=0.857（P＜0.01）。
　　 結論：
　　 1.通過介入方法進行球囊拉傷可成功建立兔腹主動再狹窄動物模型。
　　 2.腹主動脈球囊損傷后IL-8水平高表達，血管明顯狹窄，經(jīng)IL-8單克隆抗體治療后，動脈狹窄程度明顯減輕。IL-8水平與動脈狹窄程度呈正相關。
　　 3.球囊損傷引