脆性X綜合征的篩查、診斷和社會(huì)適應(yīng)能力及Fmr1基因敲除小鼠的神經(jīng)機(jī)制研究.pdf

1、脆性X綜合征(Fragile X mental retardation Syndrome，F(xiàn)XS)是一種常見的遺傳性精神發(fā)育遲滯性疾病，其發(fā)病率高達(dá)1/4000。絕大多數(shù)的FXS是由于X染色體FMR1(fragile X mental retardation-1)基因(CGG)n重復(fù)序列過度擴(kuò)展導(dǎo)致基因甲基化而引起的。男性患者臨床表現(xiàn)較女性患者嚴(yán)重，主要表現(xiàn)為中、重度的精神發(fā)育遲滯，伴特殊面容，如長(zhǎng)臉、大或招風(fēng)耳，青春期以后出現(xiàn)大睪丸，

2、許多患者還表現(xiàn)為多動(dòng)、沖動(dòng)、焦慮、社交退縮、刻板語言等孤獨(dú)癥樣行為。早期發(fā)現(xiàn)、早期治療和干預(yù)，可以顯著改善患兒預(yù)后，并為家系成員提供遺傳咨詢，避免家族中再次出現(xiàn)同樣患者，具有不可估量的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
　　本研究應(yīng)用雙重實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，即普通實(shí)時(shí)熒光定量PCR聯(lián)合甲基化敏感性限制性內(nèi)切酶定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-basedquantitative P

3、CR，MSRE-QPCR)技術(shù)，進(jìn)行FXS患者FMR1基因(CGG)n序列和CpG島甲基化程度的定量檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該技術(shù)對(duì)男性患者的診斷效率極高，既可以診斷全突變男性，也可以辨別男性全突變/前突變嵌合體，與Southern blot相當(dāng)；對(duì)女性全突變患者的甲基化分辨率也較高，可以作出診斷，但對(duì)于女性全突變和全突變/前突變嵌合體的分辨率欠佳。該技術(shù)自動(dòng)化程度高，重復(fù)性好，快速經(jīng)濟(jì)，需要DNA量少，可以進(jìn)行高通量的大樣本檢測(cè)，因此，我們建

4、議可以將其推廣用于脆性X綜合征(尤其是男性患者)的分子生物學(xué)診斷和人群篩查。
　　目前，關(guān)于我國(guó)脆性x綜合征兒童臨床特征和社會(huì)適應(yīng)能力的研究尚屬空白。本研究通過臨床檢查表和社會(huì)適應(yīng)能力量表對(duì)FXS男童進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，六項(xiàng)簡(jiǎn)易臨床檢查表≥5分的切值更適合我國(guó)FXS男童的早期篩查，該切值既可以早期發(fā)現(xiàn)可能患FXS的男童，對(duì)其進(jìn)行分子生物學(xué)診斷，提高了FXS的檢出率，又可以使61.6％的可疑患兒避免進(jìn)行脆性X綜合征的實(shí)驗(yàn)室診斷，大大

5、減少了診斷成本，而不會(huì)漏診任何患兒。對(duì)確診兒童的評(píng)估發(fā)現(xiàn)，中國(guó)FXS男童的注意缺陷/多動(dòng)障礙(attention deficiency hyperactivity disorder，ADHD)的發(fā)生率明顯高于其他國(guó)家的報(bào)道，可能與我們的患兒未積極進(jìn)行藥物治療有關(guān)。同時(shí)，研究還發(fā)現(xiàn)，我國(guó)脆性X綜合征男童的社會(huì)適應(yīng)能力較差，明顯落后于同年齡的正常兒童，與同智齡正常兒童和同智齡同年齡的唐氏綜合征(Down syndrome，DS)兒童相仿，但

6、是，各個(gè)維度發(fā)展不均衡，作業(yè)操作、參加集體活動(dòng)和自我管理能力甚至落后于DS兒童。因此，要改善我國(guó)FXS兒童的臨床癥狀和生活質(zhì)量，需要加強(qiáng)早期診斷和積極治療，以及針對(duì)患兒臨床特征的特殊訓(xùn)練和教育。
　　脆性X綜合征動(dòng)物模型的應(yīng)用，為神經(jīng)病理學(xué)機(jī)制的研究提供了條件，進(jìn)而促進(jìn)了針對(duì)神經(jīng)機(jī)制的靶向藥物治療的發(fā)展。本研究通過實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR和免疫組化、Western blot實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)Fmr1基因敲除(knockout，KO)小鼠

7、三個(gè)主要腦區(qū)(大腦皮層、海馬和小腦)突觸后致密物蛋白95(postsynaptic density protein95，PSD-95)mRNA及其蛋白質(zhì)時(shí)空表達(dá)的改變進(jìn)行了探索。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在這三個(gè)主要腦區(qū)中，PSD-95 mRNA及其蛋白質(zhì)的表達(dá)在生后第7天(P7)最低，14天明顯上升，在青春期或成年期達(dá)到高峰。與野生型對(duì)照組小鼠相比，F(xiàn)mr1 KO小鼠不管在生長(zhǎng)發(fā)育期(P7、P14、P21、P28)還是成年期(P90)，海馬部位PSD