腎虛型老年癡呆動(dòng)物模型的建立.pdf

1、在中醫(yī)辯證論治中,腎虛證是老年癡呆最常見的證型。研究腎虛型老年癡呆動(dòng)物模型對(duì)老年癡呆的中醫(yī)治療及抗癡呆中藥新藥的研究具有重要意義。本研究旨在建立一種腎虛型老年癡呆動(dòng)物模型,為抗癡呆中藥新藥的研究提供新的方法。
　　 第一部分,主要探討糖皮質(zhì)激素造成腎虛證的最佳劑量及給藥時(shí)間。采用KM種小鼠,分別給予皮下注射生理鹽水、低劑量(7.5mg/kg體重)氫化可的松、中劑量(15mg/kg體重)氫化可的松和高劑量(30mg/kg體重)氫化

2、可的松,給藥期間每日測(cè)動(dòng)物體重并觀察動(dòng)物一般狀態(tài)。分別在給藥的第10天、第20天、第30天、第40天、第50天,取出其中的每組動(dòng)物中的一些進(jìn)行自主活動(dòng)、水迷宮、胸腺和脾指數(shù)、ConA轉(zhuǎn)化率和LPS轉(zhuǎn)化率檢測(cè),以觀察不同給藥劑量的動(dòng)物在不同時(shí)間點(diǎn)的變化。結(jié)果表明,中劑量(15mg/kg)給藥30天后,動(dòng)物的狀態(tài)較符合腎虛證的表現(xiàn)。因此在下一步的研究中采用皮下注射氫化可的松15mg/kg體重,注射30天來(lái)造成腎虛證模型。
　　 第二

3、部分,主要探討腎虛型老年癡呆復(fù)合模型的造模方法。采用KM種小鼠,隨機(jī)分為兩批,每批分別分為五組:對(duì)照組:每日皮下注射生理鹽水,第20天側(cè)腦室注射無(wú)菌生理鹽水；糖皮質(zhì)激素組(T組):每日皮下注射氫化可的松注射液15mg/kg,第20天側(cè)腦室注射無(wú)菌生理鹽水；Aβ高劑量組(A組):每日皮下注射生理鹽水,第20天側(cè)腦室注射Aβ25-356μg(3μl);糖皮質(zhì)激素+Aβ低劑量組(T+低A組):每日皮下注射氫化可的松注射液15mg/kg,第20

4、天側(cè)腦室注射Aβ25-353μg(3μl);糖皮質(zhì)激素+Aβ高劑量組(T+高A組):每日皮下注射氫化可的松注射液15mg/kg,第20天側(cè)腦室注射Aβ25-356μg(3μl)。第1批動(dòng)物在側(cè)腦室注射10天后進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè),第2批動(dòng)物在側(cè)腦室注射20天后進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè),行為學(xué)檢測(cè)完畢后進(jìn)行免疫學(xué)、血清皮質(zhì)酮及腦組織病理學(xué)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,皮下注射氫化可的松15mg/kg體重,20天后側(cè)腦室注射Aβ25-356μg/只,側(cè)腦室注射10天

5、和20天后動(dòng)物均出現(xiàn)腎虛證和學(xué)習(xí)記憶障礙,均可以造成腎虛型癡呆模型。
　　 第三部分,在第二部分已初步確定腎虛型老年癡呆的造模方法,本批實(shí)驗(yàn)主要用六味地黃丸和塞絡(luò)通對(duì)所造的模型進(jìn)行方藥反證。給予小鼠皮下注射氫化可的松注射液15mg/kg體重,20天后側(cè)腦室注射Aβ25-356μg/只,第21天起分別灌胃六味地黃丸和塞絡(luò)通,灌胃10天后進(jìn)行行為學(xué)、免疫學(xué)及腦組織病理學(xué)測(cè)試。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,補(bǔ)腎藥六味地黃丸可改善模型動(dòng)物的自主活動(dòng)下降

6、、免疫指標(biāo)下降、體力下降及學(xué)習(xí)記憶障礙；而塞絡(luò)通僅能改善學(xué)習(xí)記憶障礙,可輕微改善動(dòng)物的體力下降。
　　 通過以上研究可初步得出以下結(jié)論
　　 1、皮下注射氫化可的松15mg/kg體重,注射30天是造成腎虛證小鼠模型的最佳方法。
　　 2、皮下注射氫化可的松15mg/kg體重復(fù)合側(cè)腦室注射Aβ25-356μg/只,在側(cè)腦室注射后10天和20天時(shí)均可造成腎虛型老年癡呆小鼠模型。
　　 3、補(bǔ)腎藥六味地黃丸可改