牛瑟氏泰勒蟲(chóng)病動(dòng)物模型及間接熒光抗體試驗(yàn)的建立.pdf

1、本試驗(yàn)首先選擇了嚴(yán)重免疫缺陷(SCID)鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型研究對(duì)象，按Arai等方法給SCID小鼠置換正常牛紅細(xì)胞，結(jié)果SCID鼠體內(nèi)有90％左右紅細(xì)胞被牛紅細(xì)胞所置換。給SCID小鼠人工感染牛瑟氏泰勒蟲(chóng)，通過(guò)血液涂片鏡檢觀察到在人工感染第4天末梢血液中出現(xiàn)了新增殖的牛瑟氏泰勒蟲(chóng)蟲(chóng)體，第10～12天紅細(xì)胞染蟲(chóng)率高達(dá)23％，并出現(xiàn)了與牛瑟氏泰勒蟲(chóng)病相似的貧血、血紅蛋白減少等癥狀，此后在小鼠血液中牛瑟氏泰勒蟲(chóng)逐漸減少。如果定期輸入正常牛紅細(xì)

2、胞，血液中蟲(chóng)體可持續(xù)25～30天。 在利用SCID鼠建立了牛瑟氏泰勒蟲(chóng)病動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，為了克服SCID鼠的成本高、不易飼養(yǎng)管理，給試驗(yàn)帶來(lái)不便。我們將昆明小白鼠主要免疫器官脾臟摘除和高劑量、連續(xù)注射地塞米松也能達(dá)到抑制昆明小白鼠免疫功能的目的，使牛瑟氏泰勒蟲(chóng)能感染給昆明小白鼠。昆明小白鼠人工感染牛瑟氏泰勒蟲(chóng)后的第8天，用PCR方法能檢測(cè)出特異陽(yáng)性帶；第14天在其末梢血液中出現(xiàn)少量蟲(chóng)體，紅細(xì)胞染蟲(chóng)率為0.8～3％。注射地塞米松

3、后腹腔注入感染瑟氏泰勒蟲(chóng)的牛紅細(xì)胞方法組的昆明小白鼠紅細(xì)胞內(nèi)蟲(chóng)體出現(xiàn)時(shí)間和紅細(xì)胞染蟲(chóng)率要比摘除脾臟組小白鼠的早和高。 牛瑟氏泰勒蟲(chóng)病動(dòng)物模型的建立，解決了抗原來(lái)源不足等問(wèn)題。當(dāng)SCID鼠紅細(xì)胞染蟲(chóng)率達(dá)到15％時(shí)，昆明小白鼠紅細(xì)胞染蟲(chóng)率達(dá)到3％時(shí)，自心臟采集抗凝血，用pH7.2PBS洗滌、懸浮后，加于12穴免疫熒光載玻片，制備成免疫熒光試驗(yàn)抗原片，建立了牛瑟氏泰勒蟲(chóng)病間接熒光抗體試驗(yàn)。結(jié)果表明，該法具有特異性強(qiáng)、敏感性高、操作簡(jiǎn)單