雜色蛤ACE抑制活性肽的制備及分離純化.pdf

1、雜色蛤資源豐富，蛋白質(zhì)含量高，研究表明，其提取物具有抗氧化、降血糖、抑菌等多種生物活性。
　　本論文以雜色蛤?yàn)樵?，從雜色蛤血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）抑制肽的制備、分離純化、大孔樹脂脫腥工藝優(yōu)化和相應(yīng)的調(diào)味產(chǎn)品開發(fā)這四方面進(jìn)行研究，主要研究結(jié)果如下：
　　(1)雜色蛤酶解制備ACE抑制肽的工藝優(yōu)化過程中，采用馬尿酸法測(cè)定雜色蛤酶解產(chǎn)物對(duì)ACE酶的抑制率。以ACE抑制率和水解度為指標(biāo)，對(duì)比胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶、中性

2、蛋白酶、胰蛋白酶這5種蛋白酶對(duì)雜色蛤肉的酶解效果，篩選出木瓜蛋白酶最佳。并通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)對(duì)酶解工藝進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳酶解工藝為：料液比1 g:10 mL，加酶量1.5％，酶解溫度45℃，酶解時(shí)間1.5 h，pH6.0。所得酶解液的蛋白水解度為27.75%，濃度為2 mg/mL和10 mg/mL的酶解液的ACE抑制率分別為18.5%和87.1%。
　　(2)采用超濾技術(shù)、Sephadex G-25葡聚糖凝膠、DEAE Se

3、pharose Fast Flow陰離子交換層析、Sephadex G-15葡聚糖凝膠分離純化酶解液中的ACE抑制肽。通過活性跟蹤分離所得ACE抑制肽在濃度為2 mg/mL時(shí)，對(duì)ACE酶的抑制率可達(dá)51.3%，與酶解液相比活性明顯提高。抑制動(dòng)力學(xué)研究表明，雜色蛤ACE抑制肽對(duì)ACE酶的抑制作用是非競(jìng)爭(zhēng)性的。經(jīng)MALDI-TOF質(zhì)譜分析顯示雜色蛤ACE抑制肽的分子質(zhì)量在1000 Da以下，經(jīng)紅外光譜分析，該抑制肽的結(jié)構(gòu)中含有苯環(huán)官能團(tuán)。<

4、br>　　(3)選擇7種大孔樹脂，以感官評(píng)定為指標(biāo)，靜態(tài)吸附和動(dòng)態(tài)吸附兩種方式對(duì)雜色蛤酶解液進(jìn)行脫腥效果的研究，從中選出最佳脫腥工藝為:AB-8型號(hào)大孔樹脂，靜態(tài)吸附，大孔樹脂：酶解液（體積比）=1:10，吸附溫度35℃，吸附脫腥時(shí)間2 h；動(dòng)態(tài)吸附，大孔樹脂：酶解液=1:10，流速3 mL/min，室溫。當(dāng)濃度為10 mg/mL時(shí)，酶解液經(jīng)靜態(tài)吸附后的ACE抑制率為46.09%，經(jīng)動(dòng)態(tài)吸附后的抑制率為52.1%，比未脫腥前活性有所降低