Aptamer介導(dǎo)載紫杉醇PEG-PLGA納米遞釋系統(tǒng)的構(gòu)建及其抗腫瘤研究.pdf

1、目的:構(gòu)建aptamer介導(dǎo)的載紫杉醇聚乳酸/乙醇酸-聚乙二醇共聚物(PEG-PLGA)納米粒靶向遞釋系統(tǒng)，研究其對(duì)實(shí)驗(yàn)性鼠膠質(zhì)瘤的抗癌效果。
　　方法:通過(guò)熒光顯微鏡觀察驗(yàn)證aptamer與大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的親和性。采用碳二亞胺法合成了PLGA-PEG共聚物并進(jìn)行氫核磁共振譜表征。采用乳化/溶劑揮發(fā)法制備了載紫杉醇的PLGA-PEG納米粒，以L9(34)正交試驗(yàn)篩選最優(yōu)制備方法，采用碳二亞胺法將aptamer連接到納米粒表面，并

2、用聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行驗(yàn)證，并對(duì)其作了粒徑、電性和體外釋放度表征。采用噻唑藍(lán)比色法測(cè)定了紫杉醇注射劑、納米粒和aptamer修飾納米粒對(duì)大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的毒性。采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法測(cè)定紫杉醇注射劑、納米粒和aptamer修飾納米粒在大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。采用尾靜脈注射多劑量重復(fù)給藥，以腫瘤生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)和生存期評(píng)價(jià)紫杉醇注射劑、納米粒和aptamer修飾納米粒的抗腫瘤作用。
　　結(jié)果:aptamer與C6的親和隨著apt

3、amer濃度的增高（0.05、0.25和1.25 pmol·μl-1）與孵育時(shí)間（5、15、30和60 min）的延長(zhǎng)而增強(qiáng)。以摩爾比PLGA∶PEG=1∶1，兩步反應(yīng)時(shí)間分別為4和12h合成的PLGA-PEG共聚物數(shù)均分子量約為22，800，PEG連接率為25％，產(chǎn)率44％。最優(yōu)制備方法為超聲功率180 W，時(shí)間30 Sec，投藥量2％，膽酸鈉總體積12 ml，得到的納米粒強(qiáng)度粒徑112nm，電位為-23.70 mV，包封率為49.6

4、％，在PH7.4磷酸鹽緩沖液和空白血漿中紫杉醇從納米粒中的釋放相似，24 h有45％的藥量突釋，之后緩慢釋放。約有70％的aptamer連接到納米粒表面，形成的aptamer修飾納米粒粒徑為156 nm，電位為-32.93 mV，在PH7.4磷酸鹽緩沖液和空白血漿中的體外釋放度與不修飾納米粒沒(méi)有顯著性差異。細(xì)胞存活率隨紫杉醇濃度的增高（0.038、0.38、0.76、3.8、12和24μg·ml-1）和孵育時(shí)間（24、48和96 h）的

5、延長(zhǎng)而降低。24、48和96 h時(shí)aptamer修飾納米粒的半數(shù)抑制濃度IC50分別是注射劑的2.59、4.18和4.67倍，是納米粒的2.92、3.32和2.67倍。紫杉醇注射劑、納米粒和aptamer修飾納米粒在大鼠血漿中的消除半衰期t1/2β分別為1.79、5.43和4.16 h，AUC分別為918.78、5351.30和4982.11μg·L-1h-1。腫瘤生長(zhǎng)體積aptamer修飾納米粒組＜納米粒組＜注射劑組＜生理鹽水組，20