RLT介導(dǎo)的多西紫杉醇亞微乳細(xì)胞內(nèi)動(dòng)力學(xué)及其抗腫瘤作用研究.pdf

1、紫杉醇是由歐洲紫杉的樹(shù)皮和針葉中提取的一種天然抗癌新藥，多西紫杉醇是半合成的紫杉醇衍生物，兩者同屬紫杉烷類(lèi)抗癌藥。多西紫杉醇屬于細(xì)胞周期特異性藥，主要作用于細(xì)胞有絲分裂靜止期(G2/M期)。臨床研究中，多西紫杉醇對(duì)乳腺癌、前列腺癌和肺癌等都有良好的治療效果，是目前研究的熱點(diǎn)抗癌藥物之一，具有廣泛的應(yīng)用前景。
　　 前列腺癌是男性泌尿生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)發(fā)病率逐年增加，且難以完全治愈。根本原因在于前列腺癌的化療藥物療

2、效較低，缺乏作用專(zhuān)一性，而且對(duì)正常組織也會(huì)產(chǎn)生毒副作用。
　　 為提高前列腺癌的治療效果，我們構(gòu)建了一種新型的靶向前列腺癌藥物傳遞系統(tǒng)，即加入具有靶向性的多肽片段(簡(jiǎn)稱(chēng)RLT)及長(zhǎng)循環(huán)材料DSPE-PEG2000對(duì)多西紫杉醇陽(yáng)離子亞微乳進(jìn)行修飾，得到靶向前列腺癌(RLT-DOC-SE)，并對(duì)該亞微乳進(jìn)行了體外細(xì)胞增殖抑制、細(xì)胞藥動(dòng)學(xué)及藥效學(xué)的考察。
　　 體外細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)，測(cè)定靶向前列腺癌多西紫杉醇亞微乳(RLT-D

3、OC-SE)、多西紫杉醇的陽(yáng)離子亞微乳(SA-DOC-SE)及多西紫杉醇亞微乳(DOC-SE)對(duì)前列腺癌細(xì)胞PC-3的增殖抑制作用。直接作用72h時(shí)，RLT-DOC-SE、SA-DOC-SE及DOC-SE的IC50值分別為0.34μmol/L、0.56μmol/L及1.01μmol/L；延遲作用時(shí)，三種亞微乳的IC50值分別為1.09μmol/L，1.69μmol/L及2.56μmol/L，RLT-DOC-SE對(duì)PC-3的抑制效果均強(qiáng)于

4、DOC-SE。
　　 本實(shí)驗(yàn)使用6-香豆素作為熒光探針，定性考察三種亞微乳的體外細(xì)胞攝取。研究結(jié)果顯示：6-香豆素主要集中在細(xì)胞核內(nèi)，且隨孵育時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞核內(nèi)熒光強(qiáng)度增加；各個(gè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)6-香豆素的聚積量，RLT-DOC-SE組均顯著高于DOC-SE組，說(shuō)明RLT-DOC-SE可更好的促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)藥物的聚積。
　　 建立HPLC法，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)多西紫杉醇的聚積量。以叔丁基甲醚為提取溶劑，乙腈-水(55:45，v/v)為

5、流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)231nm。多西紫杉醇濃度在25～1000ng/mL時(shí)線性范圍良好，回收率、精密度等均符合方法學(xué)考察。攝取結(jié)果表明，RLT-DOC-SE組細(xì)胞內(nèi)多西紫杉醇的聚積量顯著高于SA-DOC-SE組和DOC-SE組，說(shuō)明RLT-DOC-SE促進(jìn)了細(xì)胞對(duì)多西紫杉醇的攝取，增加了細(xì)胞內(nèi)多西紫杉醇的聚積。計(jì)算其動(dòng)力學(xué)參數(shù)，DOC-SE在細(xì)胞內(nèi)的消除速率是RLT-DOC-SE的1.44倍，說(shuō)明RLT-DOC-SE有效延緩了細(xì)胞內(nèi)多西紫杉

6、醇的消除。
　　 濃度和溫度對(duì)細(xì)胞攝取影響的考察，結(jié)果表明：細(xì)胞對(duì)多西紫杉醇的攝取呈明顯的濃度和溫度依賴(lài)性。相同藥物濃度下，細(xì)胞對(duì)藥物攝取量不同說(shuō)明亞微乳理化性質(zhì)的不同可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的攝取機(jī)制有所改變。
　　 建立小鼠腫瘤模型，計(jì)算抑瘤率，觀察腫瘤組織的病理學(xué)切片，考察靶向多西紫杉醇亞微乳的體內(nèi)抗腫瘤療效。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，RLT-DOC-SE組的小鼠腫瘤生長(zhǎng)受到明顯抑制，病理學(xué)切片也顯示出瘤組織明顯壞死。