腎上腺髓質(zhì)素對(duì)低氧和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1促成纖維細(xì)胞增殖、膠原合成的影響及機(jī)制.pdf

1、目的:該實(shí)驗(yàn)是在該研究小組以往工作的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究ADM與低氧性肺血管結(jié)構(gòu)改建的關(guān)系.以體外培養(yǎng)的人胚肺成纖維細(xì)胞為靶細(xì)胞,以低氧(2﹪O<,2>)為刺激因素,觀察:1、常氧和低氧后成纖維細(xì)胞ADM蛋白表達(dá)的變化;2、低氧對(duì)成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成的影響及ADM對(duì)其作用;3、低氧對(duì)成纖維細(xì)胞產(chǎn)生TGF-β1的作用;4、ADM對(duì)TGF-β1的拮抗作用;5、ADM對(duì)低氧引起的成纖維細(xì)胞TGF-β1合成和[Ca<'2+>]i變化的調(diào)節(jié)作用

2、,以期闡明ADM在低氧性肺血管結(jié)構(gòu)改建過程中可能發(fā)揮的作用及其發(fā)生機(jī)制,為研究防治低氧性肺動(dòng)脈高壓的途徑提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:1、采用體外細(xì)胞培養(yǎng)方法,培養(yǎng)并鑒定人胚肺成纖維細(xì)胞,建立人胚肺成纖維細(xì)胞低氧(2﹪O<,2>)模型.2、光、電鏡下觀察低氧(2﹪O<,2>)對(duì)成纖維細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)的影響.3、采用免疫組織化學(xué)(SP)方法,觀察常氧和低氧(2﹪O<,2>)后成纖維細(xì)胞ADM蛋白表達(dá)的變化.4、采用細(xì)胞計(jì)數(shù)、四氮唑鹽(MTT

3、)法、<'3>H-脯氨酸摻入法,分別觀察低氧(2﹪O<,2>)和TGF-β1對(duì)成纖維細(xì)胞增殖及膠原合成與分泌的作用及ADM對(duì)其影響.5、采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液中TGF-β1蛋白水平.6、采用激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)動(dòng)態(tài)觀測(cè)低氧時(shí)成纖維細(xì)胞[Ca<'2+>]i的變化及ADM對(duì)其影響.結(jié)論:1、體外培養(yǎng)的人胚肺成纖維細(xì)胞可表達(dá)ADM蛋白,表明肺成纖維細(xì)胞是產(chǎn)生ADM的來源之一;低氧可以促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞ADM合成.2、

4、低氧(2﹪O<,2>)可誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞增殖、膠原合成和分泌增加,這可能是低氧引起肺血管結(jié)構(gòu)改建的重要機(jī)制之一.3、ADM可以抑制低氧和TGF-β1引起的肺成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成,提示ADM具有抑制低氧和TGF-β1的促肺血管重塑效應(yīng).4、抑制低氧引起的[Ca<'2+>]i增加和抑制TGF-β1合成是ADM抑制低氧性肺血管重塑的部分作用機(jī)制.ADM具有抑制低氧性肺成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成的作用提示,ADM是一種有效的抗低氧性肺血管重塑