成人肝癌組織褪黑素受體的表達和結合特性.pdf

1、目的：觀察成人肝癌和癌旁組織有無褪黑素受體(melatonin receptor，MR)的表達及其細胞分布特點，明確MR兩種受體亞型(melatonin receptor 1，MT1和 melatonin receptor 2，MT2)在成人肝癌和癌旁組織細胞表達的差異性及其意義，為揭示褪黑素(melatonin，Mel)在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用提供依據。
　　 方法：成人肝癌手術病例切除標本常規(guī)石蠟包埋后切片，免疫組化法檢測肝癌

2、和癌旁組織MT1和MT2的表達及其細胞內分布特點；取成人肝癌和癌旁組織勻漿提取總RNA，采用RT-PCR半定量法分別分析MT1和MT2基因mRNA在肝癌和癌旁組織表達的差異性；制備成人肝癌和癌旁組織的膜蛋白，采用放射性配體結合實驗法(radioligand binding assay of receptor，RBA)檢測MR特異性結合和動力學特性。
　　 結果：
　　 1.MR在成人肝癌和癌旁組織的表達成人肝癌和癌旁組

3、織石蠟切片免疫組化法結果顯示，成人肝癌細胞細胞膜、細胞質和細胞核中MR兩種受體亞型MT1和MT2蛋白均呈聚集性顆粒狀棕褐色陽性染色，但主要表達在細胞膜和細胞質，細胞核中表達最少；癌旁組織染色強度明顯低于癌組織，棕黃色陽性染色結果呈彌散性分布，也主要表達在細胞膜和細胞質，細胞核中表達最少，分布特點同癌組織類似。
　　 2.成人肝癌和癌旁組織MR受體亞型MT1和MT2的mRNA表達的差異性提取成人肝癌和癌旁組織的總RNA，RT-PC

4、R半定量分析結果表明，成人肝癌和癌旁組織均有MT1和MT2表達，但癌組織MT1和MT2的mRNA表達水平均明顯高于癌旁組織(P<0.05)。
　　 3.放射性配體結合法分析MR的結合特性125I標記的褪黑素(125I-Mel)在成人肝癌和癌旁組織的膜蛋白上存在特異結合位點，肝癌組織和癌旁組織MR特異性結合最大結合容量(Bmax)分別為0.29±0.07 pmol·g-1和1.16±0.28pmol·g-1，癌組織明顯低于癌旁組織

5、(P<0.05)；平衡解離常數(Kd)值分別為48.7±6.5pmol·L-1和26.5±4.6 pmol·L-1，兩組無明顯差異(P>0.05)。動力學分析表明該特異性結合為可飽和和可逆性結合。
　　 結論：
　　 1.本文首次發(fā)現，成人肝癌和癌旁組織均有MR表達，包括其兩種亞型MT1和MT2。
　　 2．MR在肝癌和癌旁組織表達具有差異性，其mRNA的表達也具有明顯的差異性。
　　 3．成人肝癌和癌旁