大彈涂魚褪黑素受體的研究.pdf

1、大彈涂魚(Boleophthalmus pectinirostris)生活于潮間帶灘涂，營洞穴生活，是我國東南沿海的名特優(yōu)養(yǎng)殖魚類。前期的研究結(jié)果表明，繁殖季節(jié)大彈涂魚生殖群體呈現(xiàn)出有規(guī)律的半月周期產(chǎn)卵現(xiàn)象，血清中的類固醇激素和褪黑素也呈明顯的半月周期變化。為了進(jìn)一步了解大彈涂魚褪黑素和半月周期產(chǎn)卵習(xí)性的關(guān)系，本文采用分子生物學(xué)等方法克隆了大彈涂魚四種褪黑素受體亞型基因（mtnr1a1.4、mtnr1a1.7、mtnr1b和mtnr1c

2、），并研究了其在不同組織的表達(dá)。主要結(jié)果如下:
　　 1.mtnr1a1.4基因的部分片段長度為1471 bp，蛋白質(zhì)編碼區(qū)可編碼246個氨基酸，其中3'-UTR為728 bp; mtnr1a1.7基因全長為1501 bp，編碼一個由351個氨基酸組成的蛋白質(zhì)，5'端有一個310 bp的非編碼區(qū)，3'端有一個138 bp的非編碼區(qū);mtnr1b基因全長為2074 bp，有一個長1203 bp的開放閱讀框，5'端有一個787 bp

3、的非編碼區(qū)，3'端有一個84 bp的非編碼區(qū)，編碼一個由400個氨基酸組成的蛋白質(zhì);mtnr1c基因全長為1615 bp，有一個長1080 bp的開放閱讀框，編碼一個由359個氨基酸組成的蛋白質(zhì)，5'端有一個260 bp的非編碼區(qū)，3'端有一個275 bp的非編碼區(qū)。
　　 2.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示，四種受體亞型均是具有七次跨膜區(qū)的G蛋白偶聯(lián)受體;對已知的脊椎動物褪黑素受體亞型建樹分析進(jìn)一步證實，從大彈涂魚克隆所得的四個受體亞型分

4、別屬于Mtnr1a1.4，Mtnr1a1.7，Mtnr1b和Mtnr1c亞型。
　　 3.采用實時熒光定量方法分析，結(jié)果顯示褪黑素受體的四個亞型廣泛分布于大彈涂魚成魚的不同組織。在腦組織和視網(wǎng)膜，褪黑素受體基因的表達(dá)量顯著高于其它組織，并且在視頂蓋和中腦區(qū)域具有最高的表達(dá)量。在大彈涂魚雌魚的HPG軸中，四種褪黑素受體亞型在間腦和垂體均有分布，而在卵巢組織，只有mtnr1a1.4，mtnr1a1.7和mtnr1b表達(dá)。
　　

5、 4.繁殖季節(jié)大彈涂魚腦組織中的aanat2基因，間腦的mtnr1a1.4基因，以及卵巢中的mtnr1a1.7基因具有明顯的半月周期變化節(jié)律，即1個月有2個周期，每個周期均出現(xiàn)1個峰值。第1個峰值出現(xiàn)在上弦月附近，第2次峰值出現(xiàn)在下弦月附近，并且峰值出現(xiàn)的時間與大彈涂魚產(chǎn)卵時間一致。大彈涂魚發(fā)育成熟的卵母細(xì)胞中，在完全分離的濾泡膜和卵細(xì)胞上僅檢測到mtnr1a1.7基因的表達(dá)。
　　 5.夜間大彈涂魚腦組織褪黑素受體亞型mtn

6、r1a1.4的表達(dá)量顯著高于白天，但是在視網(wǎng)膜組織沒有觀察到mtnr1a1.4基因有明顯的周日變化。而腦組織和視網(wǎng)膜中的mtnr1a1.7和mtnr1b兩個基因，其周日表達(dá)量均呈現(xiàn)出下午顯著高于夜間和早上。mtnr1c基因在腦組織的周日表達(dá)具有兩個峰值，分別出現(xiàn)在凌晨3點和白天12點;而視網(wǎng)膜中mtnr1c則無明顯的周日表達(dá)變化。
　　 綜上所述表明，褪黑素及其受體可能是大彈涂魚半月周期產(chǎn)卵節(jié)律的關(guān)鍵因子，它通過作用于HPG軸或