鵝褪黑素受體Mel-1c基因的克隆和血清褪黑素含量的研究.pdf

1、褪黑素(melatonin，MLT)是主要由松果體合成分泌的一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素，其分泌規(guī)律呈典型的晝夜節(jié)律以及季節(jié)性變化，褪黑素的濃度在夜間升高，白天降低;在長日照季節(jié)，褪黑素濃度較低，短日照季節(jié)濃度較高。褪黑素通過作用于下丘腦-垂體-性腺軸中的多個位點(diǎn)，調(diào)節(jié)光照信息和生殖系統(tǒng)的關(guān)系，在季節(jié)性繁殖動物對于光照敏感性的調(diào)控上，褪黑素就表現(xiàn)為刺激短日照繁殖動物的繁殖活動，抑制長日照繁殖動物的繁殖活動，褪黑素還參與動物的生殖、內(nèi)分泌、免疫和神

2、經(jīng)系統(tǒng)的生物調(diào)節(jié)。褪黑素通過與受體結(jié)合來發(fā)揮其生理功能，鵝體內(nèi)存在三種褪黑素受體Mel-1a、Mel-1b、Mel-1c，其中Mel-1c受體只存在于禽類、兩棲類和魚類中，未在哺乳動物中發(fā)現(xiàn)。本試驗旨在克隆出鵝的褪黑素受體Mel-1c基因的全長編碼序列，尋找鵝Mel-1c基因編碼區(qū)SNP位點(diǎn)的分布情況。并測定鵝血清中褪黑素的含量，分析其與品種和季節(jié)間的關(guān)系，以期為通過調(diào)控褪黑素來提高動物繁殖性能提供理論依據(jù)。
　　 本研究選用鵝

3、為研究對象，提取腦組織的總RNA，采用SMARTer RACE技術(shù)，擴(kuò)增得到1158bp的鵝Mel-1c的DNA序列，通過NCBI中已經(jīng)公布的雞Mel-1c(U31821)序列比對發(fā)現(xiàn)，同源性為91％，綠頭鴨的Mel-1c受體基因同源性為97％，從構(gòu)建的進(jìn)化樹可見用Mel-1c受體基因構(gòu)建的各種動物的分子進(jìn)化樹與傳統(tǒng)物種進(jìn)化關(guān)系基本一致，Mel-1c型受體的進(jìn)化樹分析表明本試驗克隆的鵝的Mel-1c受體基因與綠頭鴨的歸為一類。
　

4、　 提取鵝血細(xì)胞中DNA，設(shè)計特異性引物，PCR法分段擴(kuò)增基因編碼區(qū)序列，測序，與參考序列比對后統(tǒng)計結(jié)果。共發(fā)現(xiàn)5個多態(tài)性位點(diǎn)，其中3個位于編碼區(qū)，未引起氨基酸的改變，分別為G486A、G501A和T699A，另外2個為位于3’端非編碼區(qū)的G1116A和G1119A。
　　 采用ELISA技術(shù)和RIA技術(shù)分別測定皖西白鵝和白羅曼鵝的夜間血清中褪黑素含量，分析在不同月份、不同品種間褪黑素的含量。從分析結(jié)果可看出皖西白鵝和白羅曼在